人腫瘤標(biāo)志物CA72-4 ELISA檢測(cè)試劑盒

CA72-4(癌抗原72-4)初被描述為由B72.3識(shí)別的抗原因子。B72.3是由相應(yīng)的原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移后的膜萃取物免疫雜交生產(chǎn)的鼠單克隆抗體。CA72-4被證實(shí)是1MDa的粘液樣糖蛋白，合成物稱(chēng)為TAG72（腫瘤相關(guān)抗原72）。TAG72蛋白的分子量為48KD. 血清和血漿中的CA72-4的水平升高見(jiàn)于某些惡性疾病，包括胰、胃、膽、結(jié)腸、乳腺、卵巢、子宮頸、子宮內(nèi)膜的腫瘤。它對(duì)胃腸道和卵巢的腫瘤有很高的診斷學(xué)的敏感性。盡管在一些良性的疾病如風(fēng)濕病和卵巢囊腫也發(fā)現(xiàn)有CA72-4的升高，但是臨床研究表明，對(duì)于胃腸道和卵巢腫瘤，特異性診斷高達(dá)95％。CA72-4的水平和腫瘤的大小及分級(jí)緊密關(guān)聯(lián)。CA72-4是胃腸道腫瘤的病人選擇治療學(xué)的監(jiān)測(cè)和隨后的護(hù)理的指標(biāo)。另外合適的指標(biāo)是CA199和CEA，另外，CA72-4是卵巢腫瘤的病人選擇治療學(xué)的監(jiān)測(cè)和隨后的護(hù)理的可靠性指標(biāo)，尤其是對(duì)于CA125陰性的病人。

【檢測(cè)原理】

DRG公司的CA72-4人腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合CA72-4分子上*抗原位點(diǎn)的單克隆小鼠抗體。一份含有內(nèi)源性CA72-4的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育，該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗CA72-4抗體。孵育后，用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過(guò)氧化物酶的總量與樣本中CA72-4的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后，顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中CA72-4的濃度成正比。

【主要組成成分】

1. 微孔板：             12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4 單克隆抗體。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（0-4）： 5支 0.5ml，即用型，濃度為0，3，20，50，100U/ml，內(nèi)含無(wú)水銀防腐劑。

3. 高低質(zhì)控：          2支 凍干粉，0.5ml，見(jiàn)“試劑準(zhǔn)備”，質(zhì)控品的濃度及范圍請(qǐng)見(jiàn)試劑瓶標(biāo)簽或質(zhì)控單。內(nèi)含無(wú)水銀防腐劑。

4. 樣品稀釋液：   1支，3ml，即用型，內(nèi)含無(wú)水銀防腐劑。

5. 酶聯(lián)物：              1支 1.4ml，10倍濃縮，標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶的抗CA72-4抗體，內(nèi)含無(wú)汞防腐劑。

6. 酶聯(lián)物稀釋液：      1支，14ml，即用型型，含無(wú)汞防腐劑。

7. 底物液：      1支，14ml，即用型。

8. 終止液：      1支，14ml，即用型，含0.5M的硫酸，避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。

9. 洗滌液（40X）：   1支，30ml。

注意：用于樣品稀釋的樣品稀釋液應(yīng)視需要而定。

實(shí)驗(yàn)需要器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標(biāo)儀(450±10nm)。

2. 移液器

3. 吸水紙

4. 蒸餾水

5. 計(jì)時(shí)器

6. 坐標(biāo)紙或是數(shù)據(jù)處理軟件

檢測(cè)步驟

CA72-4檢測(cè)每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)含有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 將實(shí)驗(yàn)所需數(shù)目的板條固定在板架上。

2. 用一次性吸嘴將20µL的標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和樣品加入相應(yīng)的檢測(cè)孔中。

3. 每孔加入100µL的新鮮配制的酶聯(lián)物。*混合十秒，在此步驟里，充分搖勻十分重要。

4. 在室溫下溫育120分鐘。

5. 快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物，每孔用400µL洗滌液洗板五次，在吸水紙上用力拍板以除去殘留的液體。注意：洗板步驟是否正確將直接影響到實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精.確性。

6. 每孔加入100µL的底物液。

7. 在室溫下溫育30分鐘。

8. 每孔加入100µL的終止液終止反應(yīng)。

9. 在加終止液后十分鐘內(nèi)，室溫下，于450±10nm處讀取吸光率。

【結(jié)果計(jì)算】

1. 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光率。

2. 以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對(duì)應(yīng)的濃度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 利用樣品的平均吸光率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值。

4. 自動(dòng)方法：使用立方函數(shù)﹑四參數(shù)模式或雙對(duì)數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。

5. 樣品的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。樣品的濃度高于.高標(biāo)準(zhǔn)品的濃度則需進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算樣品的濃度的時(shí)候，要乘以稀釋倍數(shù)。

下面是CA72-4 ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線的典型例子。

【期望值】

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須建立自己的正常值。

以下是利用DRG公司的CA72-4人腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）EIA-5071對(duì)正常成年人測(cè)試所得到的結(jié)果：

【注意事項(xiàng)】

1. 在使用前所有試劑和樣品均需平衡至室溫，所有試劑要充分混合但不要起泡。

2. 一旦實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，所有步驟都必須進(jìn)行到底而不能中斷。

3. 對(duì)每種試劑﹑標(biāo)準(zhǔn)品和樣品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。

4. 吸光率決定于溫育時(shí)間和溫度，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，建議準(zhǔn)備好所有的試劑，將需要檢測(cè)的微孔板固定在板架上，這些步驟保證每次加液步驟所需時(shí)間相同而沒(méi)有中斷。

5. 按照一般的規(guī)律，酶反應(yīng)時(shí)間與溫育時(shí)間和溫度成線性比例。

【生產(chǎn)企業(yè)】

德國(guó) DRG Instruments GmbH

【國(guó)內(nèi)售后單位】

深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司

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