合肥星肽生物科技有限公司成立于2019年，注冊資金100萬元，公司辦公場所坐落合肥光谷生物城。致力于為行業內的客戶提供技術開發、技術咨詢、技術轉讓等服務，秉承著“我們用心 客戶省心”的服務理念打造出一支敢于創新、敢于挑戰的綜合服務團隊。

主營業務：人高轉移細胞、細胞庫、試劑、抗原、多肽、耗材/消耗品、實驗儀器/設備、器械等。

本公司以技術為主導，產品的質量為核心，服務體系為保障，發揮人才優勢，長期致力于打造成*的科研企業與機構。持續通過開放的合作態度、專業的服務機制、持續的**理念全力打造企業的核心競爭力為成為上等的行業服務供應商銳意進取。

復蘇操作流程

1. 準備工作，開水浴鍋，預熱試劑，超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應細胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后風機吹 10min 后，酒精擦拭臺面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養液

3. 在液氮罐中取出細胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min

4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內，擦干管壁，用 1ml 頭將細胞轉移到已加培養液的離心管中

5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平

6. 將離心好的細胞棄上清，加入 5ml *培養基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產生氣泡，將細胞懸液接種到 10cm 培養皿中，補加 5ml 培養液

7. 混勻，十字法或者 8 字法

8. 將混好的細胞放入培養箱中培養

注意事項

1. 上述操作方案的數據可作為參考，實際操作已實驗室配備的耗材為準

2. 凍存時含 10%DMSO,事先加 9ml 培養液是為了稀釋 DMSO，理論上 1%DMSO對細胞性

3. 隔著 PE 手套能有效防止水浴過程中導致污染

4. 重懸的體積只是作為參考，具體的根據需要可進行調整

5. 由于復蘇過程中已經離心，第二天可根據實際情況選擇換液或者不換液（主要針對貼壁細胞）。

培養操作

1.復蘇細胞：將含有 1mL人高轉移細胞的懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

培養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
2. 仔細閱讀說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯 合度80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。