StarCHO Medium 全新CHO細胞化學成分確定培養基奧浦邁現貨
- 公司名稱 上海惠誠生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 StarCHO Medium
- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2023/9/26 11:08:22
- 訪問次數 697
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1L |
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貨號 | P225082 |
StarCHO Medium全新CHO細胞化學成分確定培養基奧浦邁現貨
StarCHO 是專為 CHO 細胞設計開發的全新化學成分確定基礎培養基,不含水解物、蛋白及任何動物來源,適用于常見中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(CHOZN、CHO-K1、CHO DG44 、CHO-S 等)的高密度懸浮培養,可實現重組蛋白的高水平表達。StarCHO 基礎培養基與全新高性能補料 StarCHO Feed 及超濃縮補料CDFS36聯用,可實現更高水平的蛋白表達和質量。
應用范圍
StarCHO 可應用于 CHO 細胞復蘇、傳代以及高密度流加培養。該基礎培養基適用于科研和基于細胞培養的大規模生物制品的生產,但不可直接用于人體或作為藥物使用。
儲存:2~8℃冷藏,干燥避光保存
運輸:常溫(液體)、冷藏(干粉)
液體培養基配制方法
1. 取潔凈的配制容器,建議一次性配制體積不低于 1L;
2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水,水溫控制在 25~35?C;
3. 稱量 20.45 g/L 干粉培養基,緩慢加入水中攪拌 10 分鐘;
4. 稱量 2.22 g/L 碳酸(空格)氫鈉,加入水中攪拌;
5. 緩慢加入 5N NaOH 調節 pH 到 8.3-8.5,攪拌 30 分鐘,此時應完(空格)全溶解;
6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調回至 7.0;
7. 定容到最終配液體積,繼續攪拌 5 分鐘,測 pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調回至7.0;
8. 取樣測滲透壓,加入 NaCl 調節滲透壓至 290±15 mOsm/kg(滲透壓計算公式:NaCl 添加量(g)=配液體積(L)*(290-檢測值)/31.5);
9. 繼續攪拌 10 分鐘,無菌過濾到合適容器,2~8℃避光保存。
StarCHO Medium全新CHO細胞化學成分確定培養基奧浦邁現貨
培養條件
溫度 37℃,濕度 80%,5~8%CO2
搖床設置:轉速 110-150rpm(振幅 50mm)
細胞復蘇
1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷凍的細胞;
2. 將冷凍管中的細胞液全部轉移到 125ml 含有 30ml 預溫過的 StarCHO 培養基的搖瓶中;
3. 放入 37℃,5~8% CO2,轉速 110~130rpm(振幅 50mm),濕度 80%的搖床中培養;
4. 細胞至少傳代 2 次,待其完(空格)全復蘇,細胞倍增時間(Population Doubling Time,PDT)穩定后,可按計劃進行后續操作。
細胞傳代
1. 將 StarCHO 培養基放入 37℃條件下預熱 20-30min;
2. 取細胞密度≥1×10 6cells/ml、活率≥90%、處于對數生長期中期的細胞進行傳代;
3. 按接種密度為 0.5×10 6 ~ 1.0×10 6cells/L 的最終傳代體積,計算所需種子液量;
4. 無菌轉移所需量的種子液,添加至含所需體積的已預熱的 StarCHO 培養基的搖瓶中;
5. 將搖瓶放入溫度 37℃,濕度 80%,轉速 110~150rpm(振幅 50mm),5%~8%CO2的細胞培養搖床中進行培養;
6. 每 2~3 天用新鮮的培養基按上述步驟進行傳代培養。
細胞馴化
直接接種法
1. 對于可以直接接種的細胞,可以從無血清培養基中直接接種到 StarCHO 培養基中,接種密度參考傳代步驟,并需要依據具體情況而定;
2. 繼續傳代細胞,直到細胞穩定生長;
3. 傳代幾次后,細胞密度在接種的 3~4 天內達到 2×10 6cells/ml 及以上、細胞活率>90%,且倍增時間穩定,此時可以認為細胞已被馴化成功。
梯度馴化法
1. 對于傳統的生長在 5~10%血清或無血清的細胞,采用梯度馴化法,接種密度 3×10 5~4×10 5cells/ml;
2. 監測細胞生長情況,直到細胞密度達到≥2×10 6cells/ml;
3. 用 StarCHO 培養基:原始培養基=25:75 的比例稀釋細胞。直到這個比例的培養基細胞生長良好,再進一步稀釋培養。
4. 在完(空格)全使用 StarCHO 培養基接種 3~4 天之后,活細胞計數應該至少達到 2×10 6cells/ml,細胞活性≥85%。此時,細胞已經馴化到 StarCHO 培養基中。
細胞凍存
1. 準備處于指數生長的中期,細胞活率>90%,狀態較好的細胞。
2. 測定活細胞密度,計算所需的凍存培養基體積,最終細胞密度>1×10 7cells/ml。
3. 準備所需的凍存培養基 90% StarCHO 培養基+10% DMSO,4℃冷藏保存。
4. 400×g 離心 5 分鐘,用凍存培養基重新懸浮細胞。
5. 根據項目具體需要,將懸浮液進行等分保存于適宜規格的冷凍管中。
6. 按照標準程序,對冷凍管進行自動或手工操作降溫(每分鐘降 1℃)。
7. 將細胞轉移到液氮罐中保存。