A3 人淋巴細胞白血病細胞/STR鑒定介紹

A3亞克隆來自Jurkat細胞系。用Fas抗體處理Jurkat細胞，用有限稀釋法獲得一個細胞系，此細胞系對Fas介導的凋亡產生自發抗性的比例較低。得到的亞克隆對Fas-介導的凋亡十分敏感。挑選對新霉素具有抗性的野生型A3細胞，并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體。

細胞特性

1） 來源：T細胞白血病，T淋巴細胞

2） 形態：淋巴母細胞，懸浮生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

A3 人淋巴細胞白血病細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。        

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養。

每2至3天添加一次新鮮培養基（取決于細胞密度），換液可以通過添加新鮮培養基或更換培養基來維持。或者，可以通過離心來維持，隨后以3至5×105個活細胞/ mL重新懸浮于新鮮培養基中。保持細胞濃度在2×105和2×106活細胞/ mL之間。

1，收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中，建議客戶凍存一支備用，后續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面以T25瓶為類，

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：

一、原代細胞服務
       各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
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       原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等；
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