這些永生化的人肝細胞構成了藥物毒理學研究的體外模型，并用于研究人肝細胞癌的病因和發病機理。

注意：使用的燒瓶應預先涂上 0.01 mg / mL纖連蛋白，0.03 mg / mL I型牛膠原蛋白和溶于BEBM培養基中的0.01 mg / mL牛血清白蛋白的混合物。 

1. 移除并丟棄培養基。
2. 加入新鮮的0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（2.0-3.0毫升，用于T75燒瓶）覆蓋細胞，沖洗并除去大部分胰蛋白酶溶液，留下薄涂層。
3. 使培養物在室溫（或37℃）下靜置直至細胞脫離并在倒置顯微鏡下觀察細胞直至細胞層分散（通常在5至15分鐘內）。

   注意：為了避免結塊，在等待細胞分離時，不要通過敲擊或搖動燒瓶來攪動細胞。難以分離的細胞可置于37℃以促進分散。

4. 用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑中和胰蛋白酶并通過輕輕吹打吸出細胞。通過溫和離心（150xg至400xg，8-12分鐘）除去解離劑，并將細胞重懸于新鮮的*生長培養基中。 
5. 將適當等份的細胞懸浮液加入新培養容器中。
6. 在37°C孵育培養物。 
7. 建議使用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（GIBCO目錄號25300-054）進行解離。用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑溶液（ATCC 30-2104）中和。

中等更新：每周兩到三次。

注意：有關細胞系的酶解和傳代培養的更多信息，請參閱動物細胞培養中的第10章， R.Ian Freshney撰寫的基本技術手冊，第3版，由Alan R.Liss，NY，1994出版。

冷凍培養基：補充有5％（v / v）DMSO的*生長培養基

儲存溫度：液氮氣相

氣氛：空氣，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

溫度： 37°C