注意：使用的燒瓶應(yīng)預(yù)先涂上 0.01 mg / mL纖連蛋白，0.03 mg / mL I型牛膠原蛋白和溶于BEBM培養(yǎng)基中的0.01 mg / mL牛血清白蛋白的混合物。 

1. 移除并丟棄培養(yǎng)基。
2. 加入新鮮的0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（2.0-3.0毫升，用于T75燒瓶）覆蓋細(xì)胞，沖洗并除去大部分胰蛋白酶溶液，留下薄涂層。
3. 使培養(yǎng)物在室溫（或37℃）下靜置直至細(xì)胞脫離并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞直至細(xì)胞層分散（通常在5至15分鐘內(nèi)）。

   注意：為了避免結(jié)塊，在等待細(xì)胞分離時，不要通過敲擊或搖動燒瓶來攪動細(xì)胞。難以分離的細(xì)胞可置于37℃以促進(jìn)分散。

4. 用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑中和胰蛋白酶并通過輕輕吹打吸出細(xì)胞。通過溫和離心（150xg至400xg，8-12分鐘）除去解離劑，并將細(xì)胞重懸于新鮮的*生長培養(yǎng)基中。 
5. 將適當(dāng)?shù)确莸募?xì)胞懸浮液加入新培養(yǎng)容器中。
6. 在37°C孵育培養(yǎng)物。 
7. 建議使用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（GIBCO目錄號25300-054）進(jìn)行解離。用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑溶液中和。

中等更新：每周兩到三次。

注意：有關(guān)細(xì)胞系的酶解和傳代培養(yǎng)的更多信息，請參閱動物細(xì)胞培養(yǎng)中的第10章， R.Ian Freshney撰寫的基本技術(shù)手冊，第3版，由Alan R.Liss，NY，1994出版。

冷凍培養(yǎng)基：補充有5％（v / v）DMSO的*生長培養(yǎng)基

儲存溫度：液氮氣相

氣氛：空氣，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

溫度： 37°C