熒光濾光片的特征:
1. 和燃料的激發峰、發射峰匹配,且交疊小
2. 截止深度深
3. 自發熒光小
4. 透鏡面形好,利于熒光成像的提取。如果透鏡表面的平整度不好,則會產生波前扭矩或楔角,波前扭矩會改變聚焦或成像位置,一般透射波前扭矩(TWD)比反射波前扭矩(RWD)對成像的影響更加直接,也會有更嚴格的要求。
原理:
一般采用單片無色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個表面鍍膜。增反膜的厚度會選擇為半波長的整數倍,此時反射疊加增強;增透膜的厚度為1/4波長的倍數,此時投射疊加增強。
熒光濾光片的激發和成像方式大體可分為如下三種:
聚焦型:入射激發光聚焦在待測樣品上;
寬場型:入射激發光束以較大的面積打到樣品上
全內反射型(TIRF):激發光透過樣品,觀測倏逝波成像
包含激發濾光片,發射濾光片和分色鏡,專為熒光成像應用而設計,提供長波通、單帶通、雙帶通和三帶通的熒光濾光片供您選擇。分子在吸收帶吸收激發光譜,然后在發射帶發射長波的輻射光譜,即形成了熒光光譜,這就是工作原理。在分析領域,熒光可用于對生物和化學活性進行定性判別、定量分析和實時觀察。由于靈敏度高、特異性好、簡便等特點,廣泛應用于生物和分析等領域。
熒光濾波片選取的原則是在成像端盡可能讓熒光/發射光透過,同時*阻擋激發光,獲得高的信噪比。尤其是對于多光子激發和全內反射顯微鏡的應用,微弱的噪聲也會對成像效果造成很大的干擾,因此對信噪比的要求更高。
常我們看濾光片的參數一般會看透射率光譜,但往往熒光相對于激發光的強度很弱,選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜圖——OD值。OD值更能直觀地反映濾光片對光的阻擋特性。
在選擇激發濾光片和發射濾光片時,兩者的阻擋深度光譜交點(OD交點)是重要的判斷標準,一般要求寬場光源激發是交點OD值大于5,激光激發時大于OD6,以實現較好的熒光信噪比。