NO含量測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細胞間及細胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。
測定原理：
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。為了排除樣品色素等的影響，每個樣品需做對照管。
自備實驗用品及儀器：
天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存。（用之前震蕩溶解后使用）

試劑二：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存。(用之前 60℃加熱震蕩 15min)

樣品處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10

4個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 15min，取上清置于冰上待測。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測定。

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4、質(zhì)量保證,嚴格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 550nm。

2、操作表

空白管 測定管

樣品（μL） 100

提取液（μL） 100

試劑一（μL） 50 50

試劑二（μL） 50 50

混勻，室溫靜置 15min，于微量石英比色皿/96 孔板，測定 A550，ΔA=A 測定-A 空白

NO 含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本質(zhì)量計算

NO 含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10

-3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO 含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10

-3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細胞：

NO 含量（μmol/10

4 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量）×10-3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷細胞數(shù)量（萬個）

3、其他樣品：

NO 含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反總÷V 樣= 125×（ΔA +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積，

1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本重量計算

NO 含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×10

-3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO 含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣×Cpr）×10

-3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr

2、細胞：

NO 含量（μmol/10

4 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量）×10

-3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷細胞數(shù)量（萬個）

3、 其他樣品：

NO 含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V 反總÷V 樣= 250×（ΔA +0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積，

1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。

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