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液相方法開發案例 | 根據樣品特性選擇檢測器和分離模式
液相色譜檢測方法的建立需要針對不同的樣品和分析目的，選用不同的分離模式和檢測器，充分發揮儀器性能，高效地達到分析目標。通常使用單一檢測器直接檢測可達到目標，必要時可衍生化后再檢測，或用多檢測器組合檢測。分離模式選擇與檢測器選擇的原則基本統一，即根據分析物結構性質初步判斷分離模式及流動相的選擇：根據分析物結構性質、分離模式、樣品處理方式、流動相的選擇等進行檢測器的配套選擇。分離模式和檢測器的選擇是色譜方法開發中不可分割的相互統一的重要環節。
關于分離模式和檢測器的選擇，
以下案例或可說明一二
脂肪族生物胺檢測分析
脂肪族生物胺樣品特性：此類物質紫外可見光區吸收極弱，衍生化程序繁瑣效率低且易誤差損失，是水溶性的極性物質。
方法開發思路：根據這些基本條件，我們判斷可以選擇HILIC模式，ELSD檢測器直接檢測。
檢測效果見下圖：
月旭Ultimate® HILIC Amphion II
對四種脂肪族生物胺的分離
甘油酯檢測分析
甘油酯樣品特性：此類物質為脂溶性大，不溶于水或難溶于甲醇的非極性物質。
方法開發思路：這樣的物質適用非水反相色譜法，案例見<非水反相色譜法應用案例及注意事項>。
氨基酸檢測
氨基酸樣品特性：部分紫外吸收弱，大極性和水溶性。
方法開發思路：可選擇衍生化法和非衍生化法。
兩種方法的分離效果見下圖：
月旭Ultimate® Amino Acid Plus
對23種氨基酸的非衍生法分離
月旭Ultimate® Amino Acid
對19種氨基酸的衍生化法分離
單糖寡糖類分析
單糖寡糖類樣品特性：水溶性的極性樣品，弱紫外可見吸收。
方法開發思路：這類物質常選擇示差檢測器。
月旭Ultimate® XB-NH2 分析乳果糖
蛋白、RNA，病毒等樣品分析
蛋白、RNA，病毒等樣品特性：大分子。
方法開發思路：選擇體積排阻色譜法。
月旭Xtimate® SEC-120 分析RNA
月旭Xtimate® SEC-2000
分析去致病基因的痘病毒
月旭Xtimate® SEC-300 分析IgG蛋白
關于流動相的選擇，請延申閱讀<高效液相色譜中溶劑與檢測器的兼容性>。