馬松（Masson）三色染色病理服務

一、馬松（Masson）三色染色簡介
馬松（Masson）三色染色是結締組織染色中經典的一種方法，是膠原纖維染色而經典的技術方法。三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理不陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關：分子的大小由分子量來體現，小分子量易穿透結構致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進入結構疏松的、滲透性高的組織。

二、染色步驟

1、石蠟切片脫蠟至水

2、鉻化處理或去汞鹽沉淀（甲醛固定的組織此步可略）

3、依次自來水和蒸餾水洗

4、用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10min

5、充分水洗,如過染可鹽酸酒精分化

6、蒸餾水洗

7、用Masson 麗春紅酸性復紅液5-10min。

8、以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻

9、1%磷鉬酸水溶液分化3-5min

10、不經水洗，直接用苯胺藍或光綠液染5min

11、以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻

12、95%酒精、*、二甲苯透明、中性樹膠封固

13、結果：膠原纖維、粘液、軟骨呈藍色(如光綠液染色為綠色)，胞漿、肌肉、纖維素、神經膠質呈紅色，胞核黑藍色

三、樣本說明

1、石蠟切片

取材：1、組織離體后需及時固定；2、組織標本不宜過大、過厚。

固定：1、固定液：10%福爾馬林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量與組織體積比為10:1～20:1；3、固定：適宜的固定時間，主要根據材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存：切片經60℃烤片3-5小時后，可于常溫或4℃干燥保存。

2、冰凍切片

取材：取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。

固定：樣本冰凍切片后，應立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存：固定好的切片自然風干，密封后置于-80℃、-20℃保存，盡快用于后續實驗。

3、細胞塊石蠟切片

細胞量較多的樣品，可離心分離所需細胞，用中性甲醛固定后制作成瓊脂細胞塊，然后按照制作石蠟切片的操作流程進行切片。

4、細胞爬片

在孔板里做的細胞爬片，爬片取出后，用PBS洗滌2次（根據研究目的，PBS洗滌可選擇不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘，將表面液體吹干，置于-20℃保存。若在短時間內即開展實驗，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段時間。

5、細胞涂片

細胞涂片常用的固定液有95%酒精（為常用）、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。 

四、注意事項

1、常用的固定液為中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多數抗原保存良好。

2、病理實驗切片Best是防脫片，以免實驗過程中出現掉片。若客戶提供切片，應告知切片有無防脫處理。

3、骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本，實驗過程中有較高的掉片幾率。

4、客戶可提供組織塊（以10%福爾馬林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定，如組織塊極小請事先說明）、蠟塊或切片（使用免疫組化切片，以避免實驗過程中掉片）

5、待檢測蛋白的種屬、實驗分組情況及實驗背景資料、其他具體要求等需事先說明。

6、若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進行實驗，需進行脫鈣處理。

7、浸泡在固定液中的組織樣本，在運輸中容器需密封，防止破碎、滲漏。