1、原理及適用范圍
大腸桿菌(Escherichia coli)和大腸菌群(Coliform)都是存在于溫血動物腸道和糞便的細菌,是條件性致病菌,主要造成水體污染,也可能引起食物中毒的發生。綠洲生化大腸桿菌大腸菌群測試片(FilmplateTM E.coli&coliform count plate BE203)是一種預先制備好的一次性培養基產品,可以同時檢測大腸桿菌和大腸菌群,含有大腸菌選擇性培養基、冷水可溶性的吸水凝膠和半乳糖苷酶(GAL)和葡萄糖醛酸酶(GUD)指示劑。大腸桿菌顯藍色,其他大腸菌群顯紅色,藍點加上紅點為總的大腸菌群數。 本產品適合于食品及原料中大腸菌群的計數,如消毒牛乳、冷飲和調味品等樣品的檢測,也可用于表面的衛生檢測。 執行標準:食品衛生微生物學檢驗大腸桿菌計數——PetrifilmTM 測試片法(GB/T 4789.38)。
2、操作方法
2.1、樣品處理:取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液(或生理鹽水)的取樣罐或均質杯內,制成1:10的樣品勻液,用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL稀釋液的試管內,振搖后成為1:100的樣品勻液,依次往下稀釋。
2.2、接種:一般食品選1~2個稀釋度進行檢測,含菌量少的液體樣品(如飲用純水和礦泉水等)可直接吸取原液進行檢測。將大腸桿菌大腸菌群測試片置于平坦實驗臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s左右使培養基凝固,每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3、培養:將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養箱內,堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃,培養15~24h。
3、結果判讀
培養后大腸桿菌顯藍色,其他大腸菌群顯紅色,藍點加上紅點為總大腸菌群數。
4、計數原則及報告方式
4.1、選擇菌落數在15~150個之間的紙片進行計數。
4.2、若兩個稀釋度的菌落數均在15~150之間,則取其平均菌落數乘以稀釋倍數,即為每毫升(或每克)樣品中的大腸菌群菌落形成單位數;
4.3、如果所有稀釋度的測試片上的菌落數都小于15,則計數稀釋度zui低的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之;如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長,則以小于1乘以zui低稀釋倍數報告之;
4.4、如果所有稀釋度的菌落數都大于150,計數稀釋度的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。計數菌落數大于150的測試片時,也可計數一個或兩個具有代表性的方格內的菌落數,換算成單個方格內的菌落數后乘以20(濾紙區面積為20cm2),即為測試片上估算的菌落數。報告單位以CFU/mL(或CFU/g)表示。
5、附加說明
5.1、樣品勻液的pH值應在6.5~7.5之間,必要時用1mol/L氫氧化鈉(NaOH)或1mol/L鹽酸(HCl)調節pH。
5.2、我國的食品衛生標準大多都以大腸菌群(Coliform)作為檢測指標,而歐盟等許多國家則以大腸桿菌(E.coli)作為檢測對象,因此,本產品對于出口食品和航空配餐等企業具有更廣泛的應用前景。
6、綠洲生化大腸桿菌大腸菌群測試片保存條件
本產品需存放在4℃~10℃冰箱中,保質期為一年,鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好,放到冰箱中,一個月內用完。在高濕度的環境中可能出現冷凝水,在拆封前將整包回溫至室溫。