20201ES76 BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)
參考價 | ¥278.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號20201ES76
- 所在地上海市
- 廠商性質生產廠家
- 更新時間2024/1/6 20:48:19
- 訪問次數 5213
500T(100ml) | 278.00元 | 99 件 可售 |
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供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 20201ES76 |
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應用領域 | 生物產業 |
BCA Protein Quantification Kit
BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格(元) |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型) | 20201ES76 | 500T | 278.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型) | 20201ES86 | 2500T | 778.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型) | 20201ES90 | 5000T | 1518.00 |
產品描述
BCA(Bicinchoninic acid)法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法?;陔p縮脲反應,即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+,產生一種紫藍色復合物,在562nm處有高的吸光值,該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。
該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測,也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量(100μL)的蛋白樣品,但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20(v/v),從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便,僅需少量(10-25μL)的蛋白樣品。不過,由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8(v/v),某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低低檢測水平。我司提供三種規格的BCA蛋白濃度檢測試劑盒,比色皿法分別可做50次,250次,500次。酶標法分別可做500次,2500次,以及5000次。
產品特點
1)靈敏度高,小檢測蛋白量可達0.2μg,檢測濃度下限達到10μg/mL。
2)速度快,比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。
3)線性范圍廣,20-2000μg/mL濃度范圍內有較好的線性范圍。
4)不受大部分樣品中的化學物質的影響,詳情見附表1。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | 儲存 | ||
20201ES76(500T) | 20201ES86(2500T) | 20201ES90(5000T) | |||
20201-A | BCA試劑A | 100mL | 500mL | 2×500mL | 4℃ |
20201-B | BCA試劑B | 3mL | 15mL | 2×15mL | 4℃ |
20201-C | 蛋白標準品(BSA) | 5×1mL(2mg/mL) | 10×1mL(2mg/mL) | 10×2mL(2mg/mL) | 4℃ |
運輸與保存方法
冰袋運輸。試劑盒中的A、B液室溫或4℃保存;蛋白標準品(BSA)長時間不用,可置于-20℃保存,有效期12個月。
注意事項
1)使用BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,因此需注意保持定時和定溫,以確保精確定量。
2)低溫或長期保存,若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染,則應丟棄,避免對實驗結果造成影響。
3)實驗操作規范,提高上樣量的精確度。
4)每次測定都需做相應的標準曲線,因為顯色反應與溫度和時間的變化有關,精準的蛋白定量宜每次都做標準曲線。
5)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制標準品和工作液
1. 配制BSA標準品體系
標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。BSA標準品體系配制可參考表1和表2。
表1 BSA標準品體系配制(比色皿檢測,線性范圍20-2000μg/mL)*
Vial | 稀釋液體積(μL) | 2mg/mL BSA體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
*如用比色皿檢測,每管需加100μL標準品,按3個重復計算,每個濃度至少需配制300μL。
表2 BSA標準品體系配制(微孔板檢測,線性范圍20-2000μg/mL)*
Vial | 稀釋液體積(μL) | 2mg/mL BSA體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 0 | 30 | 2000 |
B | 9 | 21 | 1400 |
C | 12 | 18 | 1200 |
D | 15 | 15 | 1000 |
E | 21 | 9 | 600 |
F | 24 | 6 | 400 |
G | 27 | 3 | 200 |
H | 49 | 1 | 40 |
I | 30 | 0 | 0=Blank |
2. 配制BCA工作液
1)計算所需要的總BCA工作液體積。
總BCA工作液體積=(標準品+待測樣品)×重復數×每個樣品所需要的BCA工作液
【注】:比色皿檢測時每個樣品加2.0mL BCA工作液,微孔板檢測每個樣品加200μL BCA工作液。
2)配制BCA工作液:50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B(A:B=50:1),充分混勻。
【注】:BCA試劑B加入BCA試劑A中后,迅速渾濁,通過混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內,室溫條件24h穩定。
二、檢測方法
1. 比色皿檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)
1)各取100μL標準品和待測樣品加入到反應管中。
2)每管加入2.0mL BCA工作液,混勻。37℃孵育30min。
【注】:也可室溫孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA檢測蛋白濃度,延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限,以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低,可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。
3)冷卻到室溫。分光光度計檢測,設定波長為562nm。用裝滿水的比色皿對儀器校零。在10分鐘內對所有樣品讀數。
【注】:由于BCA反應達不到真正的反應終點,即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續。但是,由于室溫下生色比率相當低,因此若是10min內能對所有的樣本進行562nm吸光度的測試,不會導致明顯錯誤。
4)根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/mL;Y-終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
2. 微孔板檢測方法(樣品:BCA工作液=1:8)
1)各取25μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。
【注】:樣品與工作液比例為1:8,若樣品有限,可使用10μL標準品和待檢測樣品進行檢測(即1:20),這時試劑盒的檢測范圍為125-2000μg/mL。
2)每孔加入200μl BCA工作液,振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板,37℃孵育30min。
3)冷卻到室溫,在酶標儀上的540-595nm波長范圍處檢測吸光度,其中562nm波長為*。
【注】:a)由于酶標板的光徑比比色皿短,使得酶標板檢測需要更好的樣品:BCA工作比率來獲得相同的檢測靈敏度。若使用高于562nm的檢測波長,建議延長孵育時間到2h。b)延長孵育時間或者提高樣品:BCA工作比會增高每個孔的OD562nm凈值,并且降低檢測下限和工作線性范圍。
4)根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/mL;Y-終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
附表:BCA蛋白濃度測定的兼容性
名稱 | 耐受濃度 |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium phosphate | 25mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol (pure) | 10% |
Glycine-HCl, pH2.8 | 100mM |
HEPES | 100mM |
Hydrochloric acid | 100mM |
Leupeptin | 10mg/L |
Nickel chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
Nonidet P-40 (NP-40) | 5%(w/v) |
Octyl β -glucoside | 5%(w/v) |
Potassium thiocyanate | 3.0M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH4.8 | 200mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH7.8 | 25mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5mM |
Aprotinin | 10mg/L |
Bicine, pH8.4 | 20Mm |
Bis-Tris, pH6.5 | 33mM |
Borate, pH8.5 | 50mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584) | nointerference(undiluted) |
Calcium chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
CelLytic B Reagent | nointerference(undiluted) |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride (in TBS, pH8.0) | 0.8mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent (Cat. No. 71009) | nointerference(undiluted) |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol (DTE) | 1mM |
Dithiothreitol (DTT) | 1mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10mM |
EPPS, pH8.0 | 100mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
Glucose | 10mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4M |
Imidazole, pH7.0 | 50mM |
MES, PH6.1 | 100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β-thioglucpyranoside | 5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1mM |
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) | nointerference(undiluted) |
Reportasol Extraction Buffer (Cat. No. 70909) | nointerference(undiluted) |
Sodium chloride | 1M |
Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4 | 200mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0) | nointerference(undiluted) |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH8.0 | 25mM |
Triethanolamine, pH7.8 | 25mM |
Tris | 250mM |
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP) | 1mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
HB200224