C18液相色譜柱的使用及維護方法

在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等，

1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在*酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受*純水且對極性化合物保留很好的色譜柱

2. 如果樣品極性太強，或酸性太強；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱（缺點是離子對試劑平衡時間長，對流動相pH要求比較精密，否 則很難重復實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗）

3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質，且硅膠端基封尾）或一些經過修飾的C18柱（如極性嵌入技術或堿去活技術等），他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留。

4.如果堿性化合物的極性太強，或堿性太強；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測（優點是方法開發簡單，缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少，價格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經典的檢測堿性樣品的方法）選擇強離子交換柱（缺點 是不能用來分析其它樣品，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗）也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

C18柱是一種常用的反相色譜柱，它以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，因此有較高的碳含量和更好的疏水性，對各種類型的生物大分子有更強的適應能力，適用范圍較廣，是高效液相色譜儀分析中*的色譜柱類型。

在使用液相色譜C18儀柱過程中，須注意以下事項：

1、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗，作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展*，使色譜柱的性能達到狀態。具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱進口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測器，以免污染了檢測器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過20分鐘后再接上檢測器，以1.0ml/min的流速，繼續沖洗2~8小時；

2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積； 

3、若色譜柱處于*閑置狀態時，要將色譜柱*沖洗，建議沖洗3-4小時以上，zui后保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液（如90%甲醇水）中； 

4、由于C18柱的固定相疏水性較強，在使用過程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負面影響；由于碳載量高，表現尤為明顯，建議使用過程中水相比例不超過90%；

5、色譜柱壓力升高、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效；  

6、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速沖 洗至壓力恢復即可；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測器），若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效，需尋找其他原因。

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