DWD-1紫外檢測儀
- 公司名稱 上海金達(dá)生化儀器有限公司
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- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/5/19 8:44:35
- 訪問次數(shù) 811
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我公司提供低中高壓分析制備蛋白純化系統(tǒng),快速純化系統(tǒng),藥典專用抗生素雜質(zhì)分析,核酸蛋白紫外檢測等專業(yè)設(shè)備。并已經(jīng)過幾十年的積累與經(jīng)驗,以得到廣大生化藥廠、高等科研院單位等機(jī)構(gòu)的認(rèn)可和使用。
蛋白質(zhì)280nm/254nm雙波長測定:
蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質(zhì),其吸收高峰在280nm波長處,且在此波長內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比關(guān)系,故可作為蛋白質(zhì)定性、定量測定的依據(jù),正因為如此,280nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統(tǒng)中蛋白質(zhì)濃度的連續(xù)監(jiān)控。但由于各種蛋白質(zhì)的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要準(zhǔn)確定量,必需要有待測蛋白質(zhì)的純品作為標(biāo)準(zhǔn)來比較,或且已經(jīng)知道其消光系數(shù)作為參考。另外,不少非蛋白物質(zhì)在280nm波長下也有-定吸收能力,可能發(fā)生干擾。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶堿)的影響更為嚴(yán)重。在280nm處的吸收比蛋白質(zhì)強(qiáng)10倍(每克),但核酸在254nm處的吸收更強(qiáng),其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm處的消光系數(shù)是280nm處的2倍,
而蛋白質(zhì)則相反,280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值。
通常:
純蛋白質(zhì)的光吸收比值:A280/A254》1.8
純核酸的光吸收比值:A280/A254《0.5
因此蛋白質(zhì)溶液中同時存在核酸時(生物體系大多數(shù)如此),必須同時測定OD254nm,與OD280nm。然后根據(jù)兩種波長的吸收度的比值,通過經(jīng)驗公式校正,以消除核酸的影響而推算出蛋白質(zhì)的真實含量。
蛋白質(zhì)濃度=1.45×A280-0.74×A254(mg/ml)
此經(jīng)驗公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質(zhì)(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所測定的數(shù)據(jù)來建立的。