（一）???酶標抗體結合物的純化??
在酶標記的溶液中，出現的是各種交聯物的混合物,有酶－抗體、酶－抗體－酶、抗體－抗體、酶－酶，甚至還有游離的酶和抗體。在這中間,除了抗體－酶和酶－抗體－酶外,其它都應該給予除去。
1．50%飽和硫酸銨沉淀法。?此法只能除去游離的酶及酶－酶聚合體。而不能除去其它不需要者。但是此法對酶標抗體的損耗少。
2．過SephadexG200或Sepharose－6B柱。此法較繁瑣,而且對酶標抗體的損耗較大,但提純的質量好。
（三）酶標抗體的鑒定
1．酶標抗體的活性鑒定??一般以瓊脂擴散和免疫電泳進行鑒定。使酶標抗體和相應的抗原（抗原濃度為1mg/ml）產生沉淀線,洗滌后于底物溶液中顯色,顯色后用生理鹽水漂洗,沉淀線*,說明酶和抗體都具有活性。良好的酶標結合物瓊脂擴散滴度一般應在1：16以上。
2．酶結合物的定量測定??包括酶量、IgG含量、酶與IgG克分子比值以及結合率的測定。
3．酶結合物的質量標準 純化的酶結合物的質量標準應包括以下幾個方面。
（1）酶的催化活性。
（2）免疫學活性。
（3）未聯接的游離酶的量。
（4）未聯接的原始免疫反應物的量。
（5）每個酶分子所聯接的免疫反應物分子數目。
（6）生化性質。
（7）酶標記免疫試驗效果。
酶結合物的質量差異,可引起試驗敏感度的很大變化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG結合物進行酶標記免疫試驗，可得到不同的試驗結果，故應予重視。
用于ELISA的各項指標參數見表12－40
表12－4 用于ELISA酶標抗體的各項指標參數評價 好 一般酶結合量（mg/ml） ≥1.0 ≥0.5 0.4酶結合率（%） ＞30 9～10 7酶IgG克分子比 ＞1.5 1.0 0.7