三、預期用途 偽狂犬病毒（Pseudorabies disease virus，PRV）可引起豬偽狂犬病，導致懷孕母豬流產死胎、種豬不育、仔豬發病死亡等綜合癥候群。

本試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬偽狂犬病毒抗體，可用于豬偽狂犬病毒疫苗免疫效果評價。

四、試劑盒原理

   本試劑盒系由預包被豬偽狂犬病毒重組gD蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬偽狂犬病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒抗體。

五、試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

七、適用儀器   含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

操作步驟

一、樣品準備

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二、檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

結果分析

一、參考值

實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。

二、檢驗結果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。

2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。