10606ES TRIeasy總RNA提取試劑
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 10606ES
- 產地 上海
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/9/4 17:33:26
- 訪問次數 2145
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100ml |
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貨號 | 10606ES60 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
TRIeasy總RNA提取試劑(TRIeasy Total RNA Extraction Reagent)
TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent是一種適用于各種動植物、細菌組織、細胞的總RNA抽提試劑,具有*的裂解能力,可在短時間內裂解細胞和組織樣本,并有效抑制樣本中RNA的降解,保持RNA的完整性。樣品在該試劑中能夠充分裂解,之后加入氯仿離心分層,形成上清層、中間層和有機層(鮮紅色下層),RNA分布在上層水相中,收集上清層后,經異丙醇沉淀便可得到總RNA。提取的總RNA純度高,基本不含蛋白質及基因組DNA,可直接用于Northern、點雜交、mRNA純化、體外翻譯、RT-PCR、poly(A)+選擇、RNA酶保護分析以及構建cDNA文庫等多種分子生物學實驗。
此外,樣品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,而在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。
本品操作簡單快速,所有操作可在一小時內完成。對少量的組織(50-100 mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1 g)和細胞(>107)均有較好的裂解效果。
運輸與保存方法
冰袋運輸。4℃避光保存,有效期一年。
注意事項
1. 本產品中含有苯|酚,具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會引起中毒、灼傷及其他身體傷害。使用時應穿戴防護物,如防護|服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛時,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。
2. 請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,避免RNase污染。
3. 需自備氯仿、異丙醇(新開封或提取RNA專用)、75%乙醇 (DEPC處理水配制)、DEPC和DEPC處理水。
4. 樣品用Total RNA Extraction Reagent勻漿后,如果不加入氯仿進行下游實驗,可先-70℃凍存,可保存一個月以上。
5. RNA沉淀在75%乙醇中,4℃可保存1周,-20℃可保存1年。
6. RNA半衰期比較短,易降解,建議抽提后盡快進行后續實驗。
參考用量
表1 每毫升Total RNA Extraction Reagent能夠充分裂解的最大樣本量
樣本類型 | 樣本使用量 |
貼壁細胞 | 10 cm2培養面積 |
懸浮動植物細胞或酵母細胞 | 5×106-1×107個 |
細菌 | 107個 |
動物組織 | 50-100 mg |
植物組織(多糖和多酚含量不高的) | 50-100 mg |
注:過多的樣本量可能會導致裂解不充分,并使產物純度降低。
操作流程
1. 樣品的處理
1) 樣品勻漿
A. 貼壁細胞
棄去培養液,直接往直徑3.5 cm的培養板中加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,覆蓋并反復吹打裂解細胞。
注:1. 依據培養板的面積而不是細胞的數量來決定Total RNA Extraction Reagent的所需量(每10 cm2 加1 mL)。
2. 加入Total RNA Extraction Reagent量不足時,會導致DNA污染。
3. 貼壁細胞往往不能*從培養瓶(皿)脫落,這并不意味著裂解不*。此時,細胞膜實際已*裂開,并釋放RNA,繼續后續實驗即可。
B. 懸浮細胞
離心收集細胞沉淀,每5×106-1×107個細胞加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,用移液器反復吹打。
注:加入Total RNA Extraction Reagent前應避免洗滌細胞,否則會增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和細菌可能需要使用勻漿器。
C. 動、植物組織
取-70℃凍存動物組織在液氮中充分研磨,按照表1加入適當量Total RNA Extraction Reagent混勻。或取新鮮動植物組織盡量剪碎,加入適當量Total RNA Extraction Reagent,勻漿儀進行勻漿處理。
注:樣品體積不要超過加入Total RNA Extraction Reagent體積的10%。
2) 將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置5分鐘以使核蛋白體*解離。
3) (可選)4℃,12000 g 離心10 min,取上清。
注:離心可去除樣品中較多蛋白質、脂肪、多糖或肌肉,植物的塊莖結節等。離心后的沉淀中包含有細胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時,上層是大量油脂應盡量去除,取澄清的勻漿液進行后續實驗。
2 總RNA提取
1) 向上述裂解液中加入1/5體積氯仿(如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.2 mL氯仿)。蓋緊離心管蓋,劇烈震蕩15 sec,室溫靜置2-3 min。
2) 4℃,12000 g 離心10-15 min。
注:1. 離心后混合物可分3層:上層無色水樣層,中間層,下層紅色有機苯|酚氯仿層。RNA存在于水樣層中。
2. 上層容量約為所加Total RNA Extraction Reagent總量的50-60%。如加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,上層水相約為500-600 μL。建議吸取400-500 μL,以防吸到中間層造成DNA污染。
3. 有機相和中間層是蛋白和DNA,可用于后續抽提。
3) 小心吸取上層水相至新離心管中,加入1/2體積異丙醇(如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.5 mL 異丙醇)。顛倒混勻后室溫放置10 min。
4) 4℃,12000 g 離心10 min。
注:RNA沉淀在離心前通常不可見,離心后在管側和管底形成膠狀沉淀。
5) 小心棄去上清,加入等體積 75%乙醇(DEPC水配制,如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入1 mL 75%乙醇)。渦旋充分洗滌,并輕彈管底,讓沉淀懸浮起來。
6) 4℃,7500 g 離心5 min,棄上清,注意不要丟失RNA沉淀。
注:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸到沉淀。
7) 室溫放置空氣干燥5-10 min。加入30-100 μL 無RNase水溶解RNA,待*溶解后,取少量檢測,其余溶液-70℃保存。
注:RNA沉淀不能*干燥,過分干燥會導致RNA溶解度降低。
3 產物檢測
A. RNA完整性檢測
1) 取1 μL RNA加入適當RNA loading buffer,混勻。
2) 進行電泳檢測。若出現清晰的三條帶,證明RNA完整性較好。
B. RNA純度檢測
檢測260 nm,280 nm OD值,并計算A260/A280比值。純的RNA的比值應在2.0左右。
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