Chondrex 快速膠原酶活性檢測試劑盒（Collagenase Assay Kits）
背景描述：
膠原酶（Collagenases），基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族的成員之一，屬于內(nèi)肽酶類，在三螺旋區(qū)降解天然膠原，參與結(jié)蹄組織的生理和病理周轉(zhuǎn)過程。膠原是動物基質(zhì)結(jié)蹄組織的主要纖維成分。膠原酶可能在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的多個階段中，對腫瘤細(xì)胞侵襲穿透細(xì)胞外基質(zhì)的過程起到促進(jìn)作用。膠原酶已被支持用于臨床治療杜普征氏掌攣縮（Dupuytren's contracture），佩羅尼氏病（Peyronie's disease）和傷口愈合。
膠原酶活性檢測方法很多，傳統(tǒng)的方法包括膠原酶譜法（Collagen Zymography），該法首先將樣本加入含膠原的SDS-PAGE凝膠中電泳，然后在適當(dāng)緩沖液中復(fù)性12-16h，最后染色。當(dāng)?shù)孜锉幻附到猓谡麄€黑色的背景中能看到清晰透明的降解條帶，從而來判斷是否存在膠原酶活性。該方法不僅費力費時，且很可能因復(fù)性不全逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致酶活性降低，結(jié)果出現(xiàn)較大偏差。
Rapid Collagenase Assay Kit (I) and (II)（Chondrex, Inc）
1. 試劑盒優(yōu)勢
含有測定膠原酶活性的所有必要成分包括重組人MMP-8（用作對照）和兩種類型的膠原酶活化劑。
不同于抗體為基礎(chǔ)的ELISA試劑盒僅能檢測酶蛋白的存在，這些試劑盒目的在于測定酶活性。
試劑盒使用FITC標(biāo)記的可溶性牛I型膠原或II型膠原為底物，只需2h就能完成測試。
比底物凝膠分析法（酶譜法）快10倍，檢測靈敏度比放射同位素標(biāo)記膠原法更靈敏。
2. 特異性
哺乳動物膠原酶
4. 反應(yīng)步驟
5. 試劑盒組分
組分名稱 | 數(shù)量 | 規(guī)格 | 保存 |
Reference-recombinant Human MMP-8 | 1 vial | 25µl, 100 units/ml | -80℃ |
Solution A-FITC-Collagen Dilution buffer | 1 bottle | 10ml | 4℃ |
Solution B-Sample dilution and reaction buffer | 1 bottle | 50ml | 4℃ |
FITC-collagen | 1 bottle | 10ml, 1mg/ml in 0.01M acetic acid | -20℃ |
Activator 1-20X APMA | 1 vial | 1ml | RT |
Activator 2-Trypsin | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
Proteinase Inhibitor | 1 vial | 3mg lyophilized | -20℃ |
Enhancer-Elastase | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
Stop solution-o-phenanthroline | 1 vial | 1ml 10mM in ethanol | RT |
Extraction buffer | 2 bottles | 25ml | RT |
ELISA plate black | 2 each | 96 well | RT |
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