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查看更多以蛋白質和結構與功能為根底,從分子水平上知道生命現象,已經成為現代生物學發展的主要方向,研究蛋白質,首先要得到高度純化并具有生物活性的意圖物質。蛋白質的制備作業觸及物理、化學和生物等各方面常識,但基本原理不外乎兩方面。
一是得用混合物中幾個組分分配率的不同,把它們分配到可用機械辦法別離的兩個或幾個物相中,如鹽析,有機溶劑提取,層析和結晶等;
二是將混合物置于單一物相中,經過物理力場的效果使各組分分配于來同區域而到達別離意圖,如電泳,超速離心,超濾等。在所有這些辦法的使用中有必要留意保存生物大分子的完整性,避免酸、鹼、高溫,劇烈機械效果而導致所提物質生物活性的損失。蛋白質的制備一般分為以下四個階段:挑選資料和預處理,細胞的破碎及細胞器的別離,提取和純化,濃細、枯燥和保存。
微生物、植物和動物都可做為制備蛋白質的原資料,所選用的資料主要依據試驗意圖來斷定。關于微生物,應留意它的生長期,在微生物的對數生長期,酶和核酸的含量較高,可以獲得高產量,以微生物為資料時有兩種情況:(1)得用微生物菌體排泄到培養基中的代謝產品和胞外酶等;(2)使用菌體含有的生化物質,如蛋白質、核酸和胞內酶等。植物資料有必要經過去殼,脫脂并留意植物種類和生長發育情況不同,其中所含生物大分子的量改變很大,別的與季節性關系密切。對動物安排,有必要挑選有效成份含量豐厚的臟器安排為原資料,先進行絞碎、脫脂等處理。別的,對預處理好的資料,若不當即進行試驗,應冷凍保存,關于易分化的生物大分子應選用新鮮資料制備。
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