蛋白酶功能 :
涉及到許多細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的過程:
1) 食物蛋白在消化道的消化
2) 激活無活性酶原和多肽激素/神經(jīng)轉(zhuǎn)移介質(zhì)的釋放
3) 調(diào)節(jié)血凝物質(zhì)和纖維素
4) 內(nèi)源性和外源性蛋白的細(xì)胞內(nèi)消化
5) 跨膜的蛋白轉(zhuǎn)移
6) 微生物對生物體攻擊,通過釋放蛋白酶的導(dǎo)致毒性增加
蛋白酶分類 :
根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為4類 :
1. 絲氨酸蛋白酶在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸,如: 彈性蛋白酶,血纖維蛋白溶酶,凝血酶,枯草桿菌蛋白酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶、凝血因子等。
2. 半胱氨酸蛋白酶(別名 :硫醇或SH 蛋白酶)在其催化中心含有半胱氨酸,如 : Calpain, 組織蛋白酶B、H和L。
3 天(門)冬氨酸蛋白酶 (羧基蛋白酶)在其活化中心含有天(門)冬氨酸, 如 : 組織蛋白酶D, 木瓜蛋白酶。
4. 金屬蛋白酶含有金屬離子, 即 : 鋅2+在其催化中心,如氨基肽酶,羧基蛋白酶A 和 B,嗜熱菌蛋白酶。
在分離蛋白時,組織或細(xì)胞裂解液中充滿了來自溶酶體的酶,并且原來無活性的蛋白酶原被充分激活,開始消化其周圍的蛋白質(zhì)。為避免此因素,蛋白酶抑制劑必須被加入在緩沖液內(nèi)以阻止蛋白酶對細(xì)胞組織的消化作用。來自哺乳類動物、植物、霉菌或細(xì)菌的組織,蛋白酶成分是不同的,并根據(jù)機(jī)體狀態(tài)的發(fā)展蛋白酶也可以發(fā)生變化。哺乳類動物組織分離時比細(xì)菌或其它組織分離時更需要應(yīng)用蛋白酶抑制劑使組織細(xì)胞受到*的保護(hù)。因此,在各種蛋白分離時,在各種蛋白電泳時蛋白酶抑制劑的適當(dāng)選用就成了很重要的因素。
羅氏公司的CompleteTM 混合片,使您不用再花時間去尋找合適的抑制劑,只要加一片進(jìn)緩沖液,您便可抑制多種不同的蛋白酶,有效地保護(hù)您的蛋白。這些溶解迅速的片劑方便可靠,免除了繁瑣的稱量、混合及DMSO溶解。
Roche蛋白保護(hù)產(chǎn)品——抑制劑混合片,您的全新選擇 ( cOmplete 和 PhosSTOP)
cOmplete
抑制大多數(shù)組織或細(xì)胞類型提取液中的蛋白質(zhì)水解活性, 包括動物、植物、酵母菌、細(xì)菌、真菌等。
在細(xì)胞溶解液緩沖液中加入一片速溶片即可使用,為您省去大量繁瑣的操作。您不必再用分析天平稱量多種微量,也不必再用二甲亞砜溶解。
一片速溶片可以保護(hù)10ml的細(xì)胞裂解液中的蛋白質(zhì),如果裂解液中蛋白質(zhì)水解酶的含量很高,一片速溶片作用域7ml的細(xì)胞裂解液或者10ml裂解液中投放2片速溶片。
如果需要保存可以將速溶片制成儲備液,制備方法:溶解1片速溶片指5ml重組水中保存。儲存液存放于2~8℃可以保存一天;在-15~-20℃可以保存至少4周。
高濃度存儲液可長期存放。在4°C條件下可儲存1個月,-20°C條件下可儲存至少6個月
PhosSTOP
保護(hù)天然蛋白的磷酸化狀態(tài)。利用無毒的PhosSTOP混合片劑迅速抑制多種磷酸酶的活性,能夠保護(hù)天然蛋白的磷酸化狀態(tài)(圖1)。
適用于甲醛固定。保持組織切片中蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)。PhosSTOP磷酸酶抑制劑與含甲醛(用于甲醛固定)的緩沖液具有良好的相容性。
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