在之前的“轉染方法如何選”中，物、化、生三大類轉染方法的優缺點已進行總結歸納，下面是復習時間：

電穿孔，即我們常說的“電轉”，是實驗室中除了病毒轉染、脂質體或PEI轉染外使用較為普遍的一種物理轉染方法。

對于電轉方法的使用，有人說它們能夠高效轉染難以轉染的細胞如神經元、免疫、原代細胞等，同時在現階段大熱的應用中，如基因編輯、CRISPR篩選，甚至于近年來新型崛起的合成生物學和AI制藥研發中，都常能看到電轉技術的應用。

而作為獲得今年生物技術領域四大的私募融資的實體瘤CAR-T明星公司Arsenal Biosciences，也是采用了非病毒載體的基因編輯CITE技術(CRISPR Integration of Transgenes by Electroporation)，即用電穿孔手段實現T細胞的轉基因CRISPR整合技術，使T細胞有選擇性地靶向腫瘤，從而使患者的免疫系統能夠在不破壞正常組織的情況下摧毀ccRCC細胞(clear-cell renal cell carcinoma)。

那么如何在實驗中提高電轉效率，想必是大家最關心的問題，那這八大注意事項一定能夠幫到你：

1準備好加了新鮮培養基的多孔板，并在實驗前于37°C下預平衡

2使用傳代次數少并具有推薦融合度或密度（對數生長期）的細胞

3針對于貼壁細胞，需限制胰蛋白酶暴露時間，仔細監測細胞分離情況

4根據優化方案進行細胞計數并使用適量細胞數；所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加，所用細胞過多可能導致細胞電轉效率降低

5采用高質量DNA，使用內毒素去除試劑盒進行純化；請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度

6室溫下以離心速度80-100×g和方案規定的時間進行離心

7離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液，避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭重復抽吸

8Nucleofection™核轉后，用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養基

輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉耗材底部，收集細胞

將細胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

請勿重復吹吸混合細胞