高效液相色譜法的應用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、性、離子型化合物和大分子物質均可用高效液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用高效液相色譜來分析。
高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
與經典液相色譜相比有以下優點:
速度快——通常分析一個樣品在15~30 min,有些樣品甚在5 min內即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到分離效果。
靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng,熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
色譜柱可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少,容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
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