實驗概述】
本實驗成功采用FACSCelesta的10色方案進行人外周血白細胞中T細胞亞群的的免疫分型,實現了一管即清楚區分Th/Ts/Treg/TEM/TCM/Na?veT/Mature T等十幾個T細胞亞群,對于T細胞亞群的成熟、分化及活化等的研究起到重要作用!
【實驗方法】
①/ 儀器配置
Flow cytometer | Laser |
FACSCelesta | 488nm Blue Laser 640nm Red Laser 405nm Red Laser |
②/ 多色配色方案及流式試劑
● 配色方案
PE | APC-Cy7 | Alexa Fluor-700 | BV421 | BV510 | BV605 | PE-CF594 | PerCP-Cy5.5 | BB515 | BV786 |
CD127 | CD3 | CD45RA | CD25 | CD8 | CD4 | CCR7 | CD45 | CD28 | CD27 |
● 流式試劑
Products Name | Catalog No. | Clone | Size |
BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human CD127 | 557938 | HIL-7R-M21 | 0.1 mg |
BD Pharmingen™ APC-Cy™7 Mouse Anti-Human CD3 | 557832 | SK7 | 100T |
BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 700 Mouse Anti-Human CD45RA | 560673 | HI100 | 50T |
BD Horizon™ BV421 Mouse Anti-Human CD25 | 562442 | M-A251 | 100T |
BD Horizon™ BV510 Mouse Anti-Human CD8 | 563919 | SK1 | 100T |
BD Horizon™ BV605 Mouse Anti-Human CD4 | 562658 | RPA-T4 | 100T |
BD Horizon™ PE-CF594 Mouse Anti-Human CD197 (CCR7) | 562381 | 150503 | 50T |
BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45 | 564105 | HI30 | 100T |
BD Horizon™ BB515 Mouse Anti-Human CD28 | 564492 | CD28.2 | 100T |
BD Horizon™ BV786 Mouse Anti-Human CD27 | 563327 | L128 | 100T |
BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x ) | 555899 | 100ml |
【實驗結果】
如圖所見,所有群體陰陽性區分明顯,群體集中,即使是弱表達群體Treg也區分非常清楚,實驗中使用了Diva軟件的自動補償功能,補償準確、操作極其簡單,為多色實驗提供方便、快捷且精確的補償操作。
* 本資料僅限科研用途使用
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