近年來,隨著磁珠法核酸提取技術(shù)的不斷完善與進(jìn)步,配套的全自動核酸提取儀同樣也得到了快速發(fā)展。由于這項技術(shù)的便捷、快速、無污染,同時自動化程度較高,廣泛應(yīng)用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。核酸提取儀分為兩類:一類是大型的自動化的,一般稱為自動液體工作站;另一類是小型核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動完成提取純化過程。大型自動液體工作站因為設(shè)備成本高昂,運(yùn)行成本高,適合一次提取幾千個同一種類標(biāo)本,所以得到應(yīng)用的比較少;而小型自動化的儀器,因為儀器設(shè)備和運(yùn)行成本低,操作方便得到越來越多的應(yīng)用。
面對市場上五花八門的同類型產(chǎn)品,如何選擇一款適合自己核酸提取儀,尤其是對于那些有自己試劑體系的終端客戶,采取哪些方式或步驟驗證一臺全自動核酸提取儀的優(yōu)劣,就顯得尤為重要。本文以洛陽吉恩特生物科技有限公司生產(chǎn)的32通道全自動核酸提取儀為例,整理出儀器鑒定、調(diào)試流程的通用方案,供使用者參考。
一、儀器外觀與操作界面
儀器外觀因個人喜好而定,當(dāng)然不同品質(zhì)的外觀,因選材及做工的差異成本相差較大。操作界面同樣因人而異,各有所好。考慮到生物樣本的多樣性、及實(shí)驗中突發(fā)情況的應(yīng)急處理,在此著重提出兩項功能供客戶參考。
A:強(qiáng)力吸附模式(通過分段磁吸和循環(huán)磁吸等磁棒運(yùn)動模式可適用各種樣本,尤其是那些粘稠樣本,極大地提高了磁珠的吸附效率,避免因孔內(nèi)液體粘稠造成的磁珠損失,從而導(dǎo)致實(shí)驗失敗);
B:斷電程序記憶功能:突然停電的情況下系統(tǒng)會自動保存正在運(yùn)行中的程序以及運(yùn)行進(jìn)度,下次開機(jī)時會自動提醒客戶是否要繼續(xù)之前的程序。避免電力系統(tǒng)突然故障造成的實(shí)驗失敗及珍貴樣本的損失。
二、儀器的開機(jī)檢查
儀器經(jīng)過長途運(yùn)輸顛簸震蕩,對于儀器的做工、品質(zhì)、及穩(wěn)定性等各方面要求較高,客戶取出儀器后可通過放耗材設(shè)置一個簡短的運(yùn)行程序,來初步判斷儀器的系統(tǒng)參數(shù)是否需要調(diào)整。觀察:磁棒套在每個孔位時候位于中心位置,磁吸停位點(diǎn)是否過高等等,發(fā)現(xiàn)有觸壁,撞擊底部等現(xiàn)象應(yīng)及時暫停儀器調(diào)整系統(tǒng)參數(shù)。(簡短程序需要使得儀器在深孔板的每個孔位都要進(jìn)行一次震蕩、磁吸、轉(zhuǎn)移)
三、實(shí)驗驗證儀器孔位間磁珠回收效率是否有所差異
深孔板一、七列加入適量磁珠與純水,其他列均加入純水,程序設(shè)置為磁珠經(jīng)過攪拌震蕩、磁吸、轉(zhuǎn)移從一列經(jīng)過第二、三、四、五,轉(zhuǎn)移到第六列,實(shí)驗完畢后觀察一、二、三、四、五列有無磁珠殘留,如果個別孔位有明顯磁珠殘留,應(yīng)與廠家溝通。
四、全自動核酸提取儀性能的檢驗
對于那些有自己試劑體系的客戶而言,如何確定自己的試劑體系是否與核酸提取儀兼容才是客戶關(guān)心的問題。吉恩特生物通過多年的經(jīng)驗積累,總結(jié)出了一套行之有效的實(shí)驗方,供使用者參考。
①首先驗證核酸提取儀進(jìn)行核酸純化時的回收效率以及孔間差
采用已知濃度的核酸樣本進(jìn)行核酸回收純化,因為核酸純化試劑盒的成分單一,試驗流程短,耗時較短,便于發(fā)現(xiàn)問題進(jìn)行及時調(diào)整。而且核酸樣本的濃度、比值固定,通過回收實(shí)驗?zāi)軌驑O大的反應(yīng)出一臺核酸提取儀的工作效率,同時通過觀察數(shù)據(jù)可以分析出核酸提取儀的孔間差異,如果經(jīng)過幾次這樣的純化回收實(shí)驗發(fā)現(xiàn)有某個固定孔位純化效率異常,就需要及時與廠家溝通。
②進(jìn)行全血DNA提取實(shí)驗
全血成分復(fù)雜,有一定的粘稠度,基因組大,磁珠與基因組結(jié)合時容易形成絮狀,磁珠法提取時對儀器精密度要求較高,通過全血基因組DNA提取能夠有效的反映出核酸提取儀的提取效率。
通常情況下,通過上述兩個實(shí)驗的檢驗,基本上能夠確定出一臺機(jī)器的評價,能夠通過驗證的儀器,對于一般的植物樣本、動物組織樣本、口腔式子、唾液、血清等樣本都能完成實(shí)驗,無需再次進(jìn)行儀器系統(tǒng)參數(shù)的調(diào)整。
五、技術(shù)參數(shù)
處理體積:20ul-1000ul
樣品通量:1-32
回收效率:>98%
孔間差異:CV<5%
加熱溫度:室溫-120℃
震蕩混合:多檔、多模式
消毒方式:內(nèi)置紫外消毒模塊
試劑種類:通用磁珠法試劑盒
操作系統(tǒng):GOS 1.0
操作界面:大尺寸液晶觸控
接口方式:USB、藍(lán)牙、Wifi接口
程序管理:新建、編輯、刪除模式程序,自由靈活編輯提取程序
外形尺寸:40cm*42cm*48cm
機(jī)器重量:25kg
電源配置:AC110~240V 50Hz/60Hz
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