標準菌株驗證鑒定步驟！

一、菌種活化：包括干粉標準菌株、標準貯備菌株及工作菌株；

⒈金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌標準菌株：挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，36℃±1℃培養(yǎng)18-24小時。并觀察菌落形態(tài)。

a.金黃色葡萄球菌：菌落凸起，圓形，不透明；

b.大腸埃希氏菌：菌落稍凸，圓形，濕潤，乳白色；

c.銅綠假單胞菌：菌落扁平，圓形，邊緣不整齊，光滑濕潤，可產生藍綠或黃綠色素；

d. 枯草芽孢桿菌: 表面粗糙不透明，鏡檢菌體有芽孢。

⒉白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種于改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板或PDA瓊脂平板上，30℃-35℃培養(yǎng)24-48小時。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。

黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種于改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，23℃-28℃培養(yǎng)48-96小時。菌叢呈黑褐色，粗糙。

⒊生孢梭菌：挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中，接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30℃～35℃培養(yǎng) 18-24小時；或在厭氧條件下接種于哥倫比亞瓊脂上，30℃～35℃厭氧培養(yǎng) 18-24小時。

二、菌種鑒定：

⒈金黃色葡萄球菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陽性菌(紫色)，葡萄狀排列，球菌。

兔血漿試驗：接種1個單菌落于1支兔血漿溶液中，30℃-35℃培養(yǎng)至6小時，每半小時觀察一次。凝固為陽性。金黃色葡萄球菌為陽性反應。

⒉大腸埃希氏菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。

IMVC生化試驗：

⒊銅綠假單胞菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。

氧化酶試驗：將氧化酶試紙用蒸餾水浸濕，用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個菌落，涂在試紙上。在60s內變?yōu)樗{色或藍紫色為陽性，不變色為陰性。

綠膿菌素試驗：取斜面培養(yǎng)物接種于 PDP 瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng) 24 小時，加三氯甲烷 3～5ml 至培養(yǎng)管中，攪碎培養(yǎng)基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入 1mol/L 鹽酸試液約 1ml，振搖后，靜置片刻，觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗陽性，否則為陰性。本菌為綠膿菌素試驗陽性。

熒光試驗：接種于金氏B培養(yǎng)基(或假單胞菌產熒光色素培養(yǎng)基)上，36℃±1℃培養(yǎng)18-24小時，在366nm紫色燈下有藍綠色熒光。

⒋枯草芽孢桿菌：

菌落形態(tài)：表面粗糙不透明，有皺摺。

鏡檢：用芽孢染色液染色，菌體有芽孢。

⒌白色念珠菌：

革蘭氏染色試驗：呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。

念球菌顯色培養(yǎng)基：30-35℃培養(yǎng)24-48小時，呈綠色菌落。

產芽管試驗：挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內，置 35～37℃、1～3 小時，置顯微鏡下觀察，可見到由孢子長出短小芽管。

⒍黑曲霉：

23℃-28℃培養(yǎng)48-96小時。菌叢呈黑褐色，粗糙，有黑色孢子產生。

⒎生孢梭菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭陽性梭菌，有或無卵圓形或球形的芽孢。

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基試驗：接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下培養(yǎng) 48～72 小時，應生長。

過氧化氫酶試驗：滴加 3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產生，為過氧化氫酶試驗陽性，否則為陰性。本菌為陰性反應。

三、需購買試劑：

菌株                          培養(yǎng)基及試劑

金黃色葡萄球菌    HB8278革蘭氏染色液試劑盒、HB4117 兔血漿、HB0109-7營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

大腸埃希氏菌     HBIG13  HBI大腸桿菌生化鑒定條、HB8280甲基紅試劑盒、HB8281 V-P試劑盒、HB8279 Kovacs氏靛基質試劑盒

銅綠假單胞菌     HB5187綠膿菌素測定培養(yǎng)基(PDP）、HB2100氧化酶試紙、HB8484假單胞菌產熒光色素培養(yǎng)基

枯草芽孢桿菌      HB8300芽孢染色液

白色念珠菌      HB7015念球菌顯色培養(yǎng)基、HB0236-1 1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基

黑曲霉          HB4701改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基

生孢梭菌        HB0124-1哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基、HB0124-1a硫酸慶大霉素(4mg/支)、HB8650 3%過氧化氫試液

北京百歐博偉生物技術有限公司的中國微生物菌種查詢網提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！