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ThermoScientificHalt蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物，僅用一種溶液即可方便地完成對樣品的保護(hù)

Thermo Scientific Halt蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物，僅用一種溶液即可方便地完成對樣品的保護(hù)。這種廣譜的抑制劑混合物已經(jīng)經(jīng)過專門的優(yōu)化，在抽提和純化的過程中能夠防止蛋白降解。該混合物含有針對主要蛋白酶和磷酸酶家族(詳情見下表)的抑制劑，主要抑制氨基肽酶、半和蛋白酶、/和磷酸酶。如需抑制金屬蛋白酶，還有單獨(dú)提供0.5M的EDTA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

方便的一管裝抑制劑混合物，既含有蛋白酶抑制劑也含有磷酸酶抑制劑。
四種方便的包裝：即用獨(dú)立包裝、1ml、5 x 1ml及10ml。
快速抑制-不需要解凍、不需要等待片劑溶解，開管即用。
與Thermo Scientific Pierce細(xì)胞裂解緩沖液兼容。
與質(zhì)譜(MS)兼容。

該混合物是同類產(chǎn)品中的組成形式。產(chǎn)品為溶液形式，使用DMSO作為溶劑，僅需低溫儲存而無需冷凍。在處理不足10ml的樣品時(shí)僅需吸取合適的量加入即可，但使用片劑時(shí)往往需用保險(xiǎn)刀片將其切割成合適的大小并即時(shí)進(jìn)行溶解（單一片劑的最小樣本量一般為10ml)。更加重要的是，與片劑產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品能夠在裂解過程中有效地抑制蛋白酶的同時(shí)，保持了細(xì)胞收集過程中蛋白的磷酸化狀態(tài)。由于該產(chǎn)品不含有能夠造成峰漂移的AEBSF組分，所以該產(chǎn)品能夠與MS兼容。

蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物中包含的抑制劑及其針對的酶的類別

抑制劑	目標(biāo)酶的類別
氟化鈉	/和酸性磷酸酶
原釩酸鈉（Sodium Orthovanadate）	和堿性磷酸酶
β-甘油磷酸酯	/磷酸酶
焦磷酸鈉（Sodium Pyrophosphate）	/磷酸酶
（Aprotinin）	蛋白酶
抑氨肽酶（Bestatin）	氨基肽酶
E64	半蛋白酶
亮抑蛋白酶肽（Leupeptin）	/半蛋白酶
EDTA(可選)	金屬蛋白酶

在HeLa細(xì)胞裂解液中，Thermo Scientific Halt蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物比片劑型的磷酸酶抑制劑混合物更有效地保持磷酸化的PTEN和CDC2的磷酸化狀態(tài)。去除血清后培養(yǎng)HeLa細(xì)胞24小時(shí)。然后加入含血清培養(yǎng)基并培養(yǎng)15分鐘，利用含有或者不含1X抑制劑混合物的Thermo Scientific M-PER*哺乳動物細(xì)胞總蛋白抽提試劑（產(chǎn)品貨號 78501）裂解細(xì)胞。片劑型抑制劑用1ml緩沖液溶解，然后按照1:100的比例加入到裂解試劑中。將Halt蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物直接加入到裂解試劑中。利用的抗體通過蛋白質(zhì)免疫印跡分析蛋白磷酸化狀態(tài)的保持情況。圖A. 磷酸化的PTEN,圖B.磷酸化的CDC2。使用的抗體能夠分別地識別和上的磷酸化。

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