豬同線蛋白2(ST2) ELISA 試劑盒

準備工作

豬同線蛋白2(ST2) ELISA 試劑盒

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據樣本量配好樣本希釋液

7.根據樣本量及洗板次數配好洗液

8.若需要提前設置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質控品

13.根據預實驗結果稀釋樣本

14.準備好封板膜

操作步驟：

1. 加樣：設置空白孔、標準孔和待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。每次實驗都應制作標準曲線。如果樣品濃度過高，可以用樣品稀釋液進行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物sus標記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標記抗體加99μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物su標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

6. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

注意事項

在進行ELISA檢測時，需要注意以下幾點：

1. 保證試劑盒的質量：選擇質量可靠、經過認證的試劑盒，避免使用過期或質量不穩定的試劑。

2. 標準化操作：按照試劑盒說明書進行標準化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結果的準確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩定性，避免其對檢測結果的影響。

6. 實驗數據的處理：對實驗數據進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數據轉換等，以確保結果的準確性和可靠性。

7. 質量控制：在實驗過程中，應進行必要的質量控制，如定期進行室內質控和室間質評等，以確保實驗室檢測結果的準確性。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

結果判斷:

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用專業的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。 

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

酶標板的材質:

常見的材質有聚乙烯(polyethylene,PE)，聚丙烯(polypropylene,PP)，聚苯乙烯(Polystyrene,PS)，聚氯乙烯

(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯(Polycarbonate,PC)。ELSIA中應用廣的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯質軟板薄，可剪割，價格低廉。缺點是光潔度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相應的背景值也會有所增加。通常要在酶標板表面進行離子接枝處理，在聚合物表面引入醛基、氨基、環氧基等活性官能團，提高基體表面的性能。

ELISA的優點

1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質的干擾。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。

3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。

公司簡介

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