猴促甲狀腺素(TSH)酶聯免疫試劑盒

ELISA試劑盒的實驗原理

ELISA試劑盒的實驗原理是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上的，同時結合了酶的催化作用。其基本原理包括三個方面：

1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性。

2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性。

3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上，因而具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物，它可以催化底物分子發生反應，產生放大作用，正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。

猴促甲狀腺素(TSH)酶聯免疫試劑盒

ELISA試劑盒的操作步驟如下

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.結合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢血清，每孔100μl，要設立陰性對照，37℃孵育1.5h。

6.洗滌：同上。

7.結合酶標二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀釋倍數根據產品不同有所不同，可按說明書進行）50μl，37℃孵育1h。

8.洗滌：同上。

9.顯色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室溫避光顯色10min。

10.待顯色后，每孔加入50μl終止液（2mol/L H2SO4）終止反應。使用酶標儀讀取450nm的OD值，以確定血清抗體水平。

以上步驟僅供參考，具體操作請根據實際情況和產品說明書進行。

注意事項

1. 保證試劑盒的質量：選擇質量可靠、經過認證的試劑盒，避免使用過期或質量不穩定的試劑。

2. 標準化操作：按照試劑盒說明書進行標準化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結果的準確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩定性，避免其對檢測結果的影響。

6. 實驗數據的處理：對實驗數據進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數據轉換等，以確保結果的準確性和可靠性。

7. 質量控制：在實驗過程中，應進行必要的質量控制，如定期進行室內質控和室間質評等，以確保實驗室檢測結果的準確性。

ELISA試劑盒組成

ELISA測定結果計算方法

1.計算陰性對照A值的平均數(NCX )和陽性對照A值的平均數(PCX)。

2.兩個平均數的差(P-N)必須大于一個特定的數值，例如0.400，試驗才有效。

3.3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。

4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。

5.標本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。

需要注意的是，試劑盒的常數只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

產品包裝：盒裝

性狀：瓶裝液體

規格：96T/48T

保存條件：2-8℃

保存期限：6個月

運輸條件：2-8℃低溫運輸，用干冰或者生物冰袋低溫運輸。

ELISA的發展史

1、 目前，分子生物學正在并肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的。

2、ELISA測定技術的發展主要在于方法學的發展，而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。

3、ELISA試劑盒它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

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