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猴Pirin蛋白(PIR)酶聯免疫ELISA試劑盒
實驗原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學基團,能夠與待測抗原或抗體特異性結合。
2. 酶標記的抗體或抗原的結合:將酶標記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結合,形成酶標記的抗原-抗體復合物。酶標記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測抗原或抗體形成穩定的復合物。
3. 底物顯色反應:當酶標記的抗原-抗體復合物與底物溶液接觸時,酶能夠催化底物分解,產生顏色變化。通過測量顏色的變化程度,可以判斷待測抗原或抗體的濃度。
試劑盒性能
檢測范圍:5 pg/mL – 160 pg/mL。
靈敏度:檢測濃度小于1.0 pg/mL。
特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。
猴Pirin蛋白(PIR)酶聯免疫ELISA試劑盒
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
標準品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說明書進行稀釋 |
標準品xi釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
檢測抗體 | 6mL | 3mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說明書進行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
實驗步驟
1. 準備試劑盒:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘以上,使試劑盒恢復至室溫。
2. 加樣:分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔,每孔加入50μl。
3. 孵育:用封板膠紙封住反應孔,輕輕振蕩混勻,37℃孵育1小時。
4. 洗滌:甩去孔內液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
5. 加酶標二抗:每孔加入50μl酶標二抗溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育30分鐘。
6. 洗滌:甩去孔內液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育15-20分鐘。
8. 終止反應:每孔加入50μl終止液,輕輕振蕩混勻。
9. 讀數:用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。
注意事項
1. 試劑盒保存于2-8℃,切勿反復凍融或長時間保存于室溫。
2. 實驗前確保所有試劑均已恢復至室溫。
3. 加樣時注意避免產生氣泡。
4. 洗滌時要保證充分洗滌,避免殘留物影響實驗結果。
5. 底物溶液應避光保存,避免長時間暴露于空氣中。
6. 酶標儀應使用450nm波長進行讀數,其他波長可能導致誤差。
7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考,不適用于臨床診斷和治療。
結果分析
根據試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值,利用標準品繪制的標準曲線,計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數據處理,通過計算得到待測樣品的濃度。
化學實驗室守則
1. 實驗室要保持安靜,嚴禁大聲喧嘩、吵鬧。
2. 在實驗前,要預先作好實驗前前準備,進入實驗室時,要有秩序,按規定的座位就座。
3. 實驗前,必須了解清楚實驗內容、目的、要求和實驗步驟。
4. 實驗開始時,應先查點儀器、產品是否齊全,不得隨意調換,如發現問題,及時報告。
5. 實驗必須按步驟進行,并仔細觀察,做好記錄,實驗后后及時寫好實驗報告。
6. 實驗時,要愛護儀器,節省產品,由于違反操作規程而損壞丟失的儀器,必須賠償。
7. 實驗結束,要將儀器整理或清洗,保持桌面,室內的整潔后才能離開。
8. 本守則在實驗前都應需知。
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