當前位置:> 供求商機> 高效脂質體轉染試劑U-300 細胞培養
產品特點:
提供優良的性能,以針對難轉染的細胞系實現了較高轉染效率的試劑
轉染試劑對細胞作用溫和,毒性很低
相比其他轉染試劑具有更高的轉染效率和更低的用量 適用細胞更加廣泛,有效轉染難于轉染的細胞系
能有效轉染的細胞類型包括:
肺癌細胞(A549、NCI-H460)骨肉瘤細胞(U-2 OS、Saos-2)
結腸癌細胞(Caco2、SW480)胰腺癌細胞(PANC-1)
皮膚黑色素瘤細胞(SK-MEL-28)成纖維細胞(3T3、COS-7)
肝細胞(HepG2、HuH7)紅白血病細胞(K562)
乳腺癌(MCF7、Hs578T)前列腺癌(LNCap)
成肌細胞(C2C12、L6 CRL-1458)
產品規格:
(備注:以下為常用規格,更多規格可根據客戶需求定制)
儲存事項: 冰袋或者濕冰運輸,短時間內可室溫運輸,但需避免光源熱源。
長時間儲存于 4℃,切勿凍存,有效期24個月。
產品用于:僅供研究使用,不適用于人或動物的體外診斷與治療。
由于實驗受多種因素影響具有不確定性,本說明書操作說明僅供參考,最終解釋權歸本公司所有。
警告!產品對人體危害性未知,請遵循操作說明。穿戴適當的防護眼鏡、衣服和手套!如果不小心接觸,應立即用大量的水沖洗,如引起身體不適應前往醫院治療。
注意事項: 轉染siRNA至細胞時,遵循如上所述的DNA實驗方案,但在稀釋siRNA 時不要加入 B-300試劑。在無血清培養基中制備 DNA-U33-300復合物,直接將其加入含細胞培養基的細胞中。(有無血清或抗生素均可 ) 轉染后無需去除轉染復合物或者更換/添加培養。 整個實驗過程避免細胞污染,由于不同細胞耐受性不同,我們建議您在做批量實驗前,可根據實際質粒和細胞的轉染效率,分不同梯度量先做預實驗,摸索最佳DNA和U33-300 Transfection Reagent的混合比例。步驟里面測試推薦的兩種濃度的并非固定濃度,優化后可根據自身細胞情況調整用量。
操作步驟:
(以六孔板的貼壁細胞DNA轉染為例) 細胞準備。
1.轉染前一天將細胞接種至六孔板內,細胞接種數量視其生長速度和細 6 胞系類型而定,一般為0.5-1×10 個細胞。
2.轉染時要求細胞生長的匯合度為70~90%,轉染前兩小時對細胞進行換液。(細胞狀態與轉染效果影響很大,選擇最佳的細胞狀態更有利于轉染效率提高和轉后細胞狀態的恢復) 將3.75 μl和7.5 μl 的U33-300分別加至另外125 μl無血清的OPTI-MEM培 養基中,輕輕混勻,室溫靜置2-3分鐘。
3. 將5 ug 質粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無血清OPTI-MEM培養基稀釋,制 DNA 預混液勻,然后添加10 ul B300 試劑并充分混勻。
4.在每管已稀釋的U-300試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘。
5.將DNA和U33-300混合液滴加至六孔板的孔內,前后左右晃動孔板混勻,置于培養箱中培養。
6.轉染18-48小時后,倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達,或加入抗性培養基篩選穩定表達細胞系單克隆。
用量參照表:
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