Cy3 maleimide,CY3-馬來酰亞胺
CAS號 : | 1593644-29-1 |
分子式 : | C36H43ClN4O3 |
分子量 : | 615.20 |
ex/em : | 554/566 nm (PBS緩沖液) |
消光系數(ε) : | 150000 L?mol?1?cm?1 |
量子產率(Φ) : | 0.31 |
溶解性 : | 可溶于氯仿,甲醇,乙腈,DMF等有機溶劑,難溶于水 |
保存條件 : | 避光,干燥,-20oC保存 |
運輸條件 : | 室溫 |
Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素熒光染料。它的熒光很亮,并且對pH不敏感,一般可以用530nm-561nm的激光束激發(fā)然后用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察,所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。標記后,Cy3的背景熒光一般認為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標記蛋白,抗體,多肽,核酸分子,納米粒等。
馬來酰亞胺(maleimide)是生物標記反應中常用的基團,它可以和巰基(-SH)通過親和加成反應生成穩(wěn)定的巰醚(thioester)結構從而實現標記。盡管胺基(比如賴氨酸精氨酸側鏈)也有親和性,但在中性或微酸性緩沖液中,馬來酰亞胺選擇性標記巰基(反應速度比胺基快>1000倍)。標記反應反應迅速,選擇性高,產率好,另外,巰基是一種在生物分子中廣泛存在的官能團,比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和雙硫鍵等,因此馬來酰亞胺/巰基(maleimide/thiol)標記已成為僅次于NHS/胺基標記的常用生物連接反應(bioconjugation)。
Cy3-馬來酰亞胺的水溶性較低,所以在水相的標記反應體系內需要使用有機共溶劑,常用有機溶劑包括DMF,DMSO和乙腈等。如需標記的分子對有機溶劑敏感,可選擇磺化花青素(sulfonated cyanine),即磺化Cy3-馬來酰亞胺。兩者的光譜性質幾乎一致,因此大部分應用可相互替換。兩者的主要區(qū)別在于:磺化染料是水溶性的,在水相的標記反應體系內不需要使用有機共溶劑,并且降低染料在水中聚集的可能性,增強標記效率。
Cy3-馬來酰亞胺標記后的產物Ex/Em是554/566nm。和它具有相似熒光特性的染料包括TAMRA,Alexa Fluor 555,DyLight 550,BODIPY® TMR-X等。
注意事項
Cy3-馬來酰亞胺水溶性較低,標記反應可在純有機溶劑中進行或者含有機助溶劑的水相中進行。
天然生物分子中巰基一般于氧化狀態(tài)(如雙硫鍵)存在,在馬來酰亞胺標記前,還原劑(如DTT,TCEP)活化巰基并除去多余還原劑。
馬來酰亞胺也可以和疊氮化合物反應,應避免疊氮官能團。
標記反應不要放在強光下,因為大部分熒光化合物在強光下長時間照射會緩慢光漂泊(photobleaching)。
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