Annexin V-iFluor 488/PI 細胞凋亡檢測試劑盒
MCE 國際站：Annexin V-iFluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4°C, 2 年避光保存
簡介：MCE Annexin V-iFluor 488/PI 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經 Annexin V-iFluor 488 和 PI 聯合染色后，正常細胞基本無熒光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡細胞呈綠色熒光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光 (Annexin V+/PI+)。
概述：MCE Annexin V-iFluor 488/PI 細胞凋亡檢測試劑盒采用 iFluor 488 標記的重組人 Annexin V 檢測細胞凋亡。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS) 位于細胞膜內側；細胞凋亡早期，PS 會外翻到細胞膜外側。Annexin V (膜聯蛋白 V) 是一種 Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，可與 PS 特異性結合，因此Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經 iFluor 488 標記后可發綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。此外，本試劑盒中的碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色熒光染料，可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。經 iFluor 488 和 PI 聯合染色后，正常細胞基本無熒光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡細胞呈綠色熒光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光 (Annexin V+/PI+)
描述：
MCE Annexin V-iFluor 488/PI 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速便捷的方法來檢測細胞凋亡和壞死。在正常活細胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質表面。在細胞凋亡開始時，PS 從膜的內層轉移到外層。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，對 PS 具有高親和力。用 iFluor 488 標記的 Annexin V 可以通過與外層暴露的 PS 結合來識別凋亡細胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細胞膜不透性染料，對活細胞和早期凋亡細胞無效，但對晚期凋亡細胞和壞死細胞則呈紅色熒光。用Annexin V-iFluor 488和PI對細胞進行染色后，活細胞無熒光或僅有少量熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細胞呈現綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞和壞死細胞呈現紅色和綠色熒光（Annexin V+/PI+）。
操作說明：1. 收集細胞：收集 1-5 × 105個細胞。懸浮細胞：2000 rpm 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀， 2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，洗滌兩次，保留細胞沉淀。貼壁細胞：小心吸取細胞培養液保存備用。加入適量預冷的 PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液 (盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 與 PS 結合) 消化細胞。加入前面收集的細胞培養液，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，2000 rpm 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，洗滌兩次，保留細胞沉淀。2. 加入 500 μL 1× Binding Buffer，輕輕重懸細胞。注：使用 ddH2O 將 10× Binding Buffer 稀釋為 1× Binding Buffer，如取 0.1 mL 10× Binding Buffer 加入 0.9 mL ddH2O，充分混勻后即為 1× Binding Buffer。3. 加入 5 μL Annexin V-iFluor 488，輕輕混勻。4. 加入 5 μL PI Solution，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 15-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數次以加強染色效果。6. 檢測與分析流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度。注：a. 流式檢測時，iFluor 488 最大激發波長為 488 nm，最大發射波長為 514 nm，在 FL1 通道檢測；PI-DNA 最大激發波長為 535 nm，最大發射波長為 617 nm，在 FL2 或 FL3 通道檢測。b. 建議設置三組對照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-iFluor 488 單染組。熒光顯微鏡檢測：2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL 1× Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。
注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應盡快檢測熒光強度，且整個實驗過程盡量避光進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞，應盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-iFluor 488 降解從而導致染色失敗。3. 流式細胞儀檢測時，若 Annexin V-iFluor 488 單獨染色組出現較多 PI 假陽性細胞，可用 PBS 將 Annexin V-iFluor 488 稀釋 3-10 倍后再進行檢測。4. Annexin V-iFluor 488 和碘化丙啶（PI）均對人體有害，操作時務必小心。5. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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