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一、牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測試劑盒
通用名:牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus A/O (ELISA)
二、包裝規格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
三、預期用途 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。
用于檢測牛羊血清中口蹄疫病毒A/O型抗體,可用于口蹄疫病毒A/O型疫苗免疫效果評價。
四、原理
牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測試劑盒由預包被口蹄疫病毒A/O型抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測牛羊血清樣本中口蹄疫病毒A/O型抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本和抗體工作液,經溫育后洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,若樣品中含有口蹄疫病毒A/O型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合,從而使后續反應不出現顯色;反之則出現顯色;顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值, 即可知樣品是否含有口蹄疫病毒A/O型抗體。
五、牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體試劑盒組成
酶標板、酶標記物、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照
六、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為12個月。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl;樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應15分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照吸光值≥0.8,陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。