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一、羊小反芻獸疫病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒
通用名:羊小反芻獸疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途
小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)引起的一種急性接觸性傳染病,其特征為口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動(dòng)物為山羊,也可感染綿羊、白尾鹿等,但對(duì)牛無(wú)感染性。
用于檢測(cè)羊血清中小反芻獸疫病毒抗體,可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
四、試劑盒原理
羊小反芻獸疫病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒系由預(yù)包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。
五、羊小反芻獸疫病毒抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl;樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl血清樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
【參考值】實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照吸光值≥1.0,陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. PI(阻斷率)=(1- )×100%,PI≥50%為陽(yáng)性;PI<50%為陰性。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性表明羊只抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。