外泌體(exosome)是一種由細胞內多泡體(multivesicular body,MVB) 與細胞膜融合后,分泌到細胞外基質中的膜性囊泡。在正常的生理過程中發揮著介導細胞間通訊的重要功能,可用于監測臨床狀態,治療反應,疾病進展等,同時由于它們具有遞送生物分子的功能,因此它們還有發展成臨床藥物遞送載體的潛力。
外泌體產生于所有類型的動植物細胞,并且不同細胞、不同生長狀態的細胞分泌的外泌體差異性很大,因此,為了得到更高濃度、異質性相對較小的外泌體,細胞培養上清是外泌體的最佳來源途徑,細胞培養上清中外泌體濃度低、粒徑小、粒徑分布廣(30-150nm,可能有大囊泡存在),實時定量監控外泌體分泌情況是工程化外泌體生產的重點也是難點。
納米庫爾特粒度儀(電阻法RPS)可在單顆粒水平對外泌體進行粒徑濃度分析,可無標記直接檢測任何培養基類型的細胞培養上清中的外泌體,精準得到外泌體樣本中的完整、真實的粒徑濃度分布,并且3-5分鐘即可完成檢測,是外泌體培養工藝開發中的得力助手,可助力篩選最佳的培養基以及培養條件。
01篩選無外源性培養基
傳統的培養基都會用到牛血清以補充細胞所需營養,但血清會或多或少引入外源性的外泌體,從源頭上造成了后續外泌體樣本的污染。通過其他成分代替牛血清,或者經過分離除去外泌體,已經有各種類型的無外源性外泌體培養基上市,但都真正做到了沒有污染嗎?針對這種疑問,筆者選取了八種不同的聲稱無外源性外泌體的培養基進行測試。
圖1.外泌體培養基測試
通過測試可見,并非所有的培養基都做到了真正的無外源性外泌體,還需擦亮您的眼睛,借助納米庫爾特粒度儀對其進行嚴格的篩選,挑選合適的培養基。
02培養條件優選
在通常的外泌體培養過程中,都是分離富集后再進行測定,若純度過低或含量太少,不符合下游研發需求,則需要重新進行培養,消耗大量的時間成本;亟需一種準確、可靠和快速的方法實時監控細胞培養過程中外泌體的分泌含量,使科研工作事半功倍,納米庫爾特粒度儀十分符合這種應用場景,使外泌體的研發更高效。
圖2.外泌體培養上清實時跟蹤測試
在對某培養條件的細胞上清進行跟蹤測試后發現,外泌體的濃度在培養第5天時達到峰值,往后濃度有所降低,并且粒徑分布也有所變化。
總結:
納米庫爾特粒度儀(電阻法RPS)在外泌體生產工藝研發應用中有以下優勢:
1.方便快捷,可以做到實時監測。
2.與樣本折射率無關,可應對各種成分的培養基。
3.單顆粒檢測,大小囊泡之間無互相影響,可得到真實的粒徑分布數據。
4.直接檢測外泌體體積粒徑,粒徑準確度媲美電鏡。
5. 精準的濃度測量,可分析不同粒徑范圍內的顆粒濃度。
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