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外泌體培養基你選對了嗎?

閱讀:424      發布時間:2023-5-18
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      體(exosome)是一種由細胞內多泡體(multivesicular bodyMVB) 與細胞膜融合后,分泌到細胞外基質中的膜性囊泡。在正常的生理過程中發揮著導細胞間通訊的重要功能,可用于監測臨床狀態,治療反應,疾病進展等,同時由于它們具有遞送生物分子的功能,因此它們還有發展成臨床藥物遞送載體的潛力。

體產生于所有類型的動植物細胞并且不同細胞、不同生長狀態的細胞分泌的外體差異性很大,因此,為了得到更高濃度、異質性相對較小的外體,細胞培養上清是外體的最佳來源途徑細胞培養上清中外體濃度低、粒徑小、粒徑分布廣(30-150nm,可能有大囊泡存在),實時定量監控外體分泌情況是工程化外泌體生產的重點也是難點。

納米庫爾特粒度儀(電阻法RPS可在單顆粒水平對外體進行粒徑濃度分析,可無標記直接檢測任何培養基類型的細胞培養上清中的外體,精準得到外體樣本中的完整、真實的粒徑濃度分布,并且3-5分鐘即可完成檢測,是外泌體培養工藝開發中的得力助手,可助力篩選最佳的培養基以及培養條件

01篩選無外源性培養基

傳統的培養基都會用到牛血清以補充細胞所需營養血清會或多或少引入外源性的從源頭上造成了后續外體樣本的污染通過其他成分代替牛血清,或者經過分離除去外體,已經有各種類型的無外源性外體培養基上市,但都真正做到了沒有污染嗎?針對這種疑問,筆者選取了八種不同的聲稱無外源性外體的培養基進行測試。

img1 

1.體培養基測試

通過測試可,并非所有的培養基都做到了真正的無外源性外體,還需擦亮您的眼睛,借助納米庫爾特粒度儀對其進行嚴格的篩選,挑選合適的培養基。

02培養條件優

在通常的泌體培養過程中,都是分離富集后再進行測定,若純度過低或含量太少,不符合下游研發需求,則需要重新進行培養,消耗大量的時間成本;亟需一種準確、可靠和快速的方法實時監控細胞培養過程中的分泌含量,使科研工作事半功倍,納米庫爾特粒度儀十分符合這種應用場景,使外體的研發更高效。

img2 

2.泌體培養上清實時跟蹤測試

在對某培養條件的細胞上清進行跟蹤測試后發現,外體的濃度在培養第5天時達到峰值,往后濃度有所降低,并且粒徑分布也有所變化。

總結:

納米庫爾特粒度儀(電阻法RPS)在外泌體生產工藝研發應用中有以下優勢:

1.方便快捷,可以做到實時監測。

2.與樣本折射率無關,可應對各種成分的培養基。

3.單顆粒檢測,大小囊泡之間無互相影響,可得到真實的粒徑分布數據。

4.直接檢測外體體積粒徑,粒徑準確度媲美電鏡。

5. 精準的濃度測量,可分析不同粒徑范圍內的顆粒濃度。

 

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