CHO-GS中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（谷氨酰胺系統(tǒng)）

細(xì)胞介紹
CHO-GS細(xì)胞是用含單抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因標(biāo)記的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞CHO，再通過(guò)L-氨基亞砜蛋氨酸(methionine sulphoximine，MSX)等化合物選擇加壓促使GS基因和目的蛋白基因擴(kuò)增，篩選獲得重組細(xì)胞株，可在不含谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長(zhǎng)、增殖，可避免或減少細(xì)胞代謝過(guò)程中谷氨酰胺降解積累的氨對(duì)細(xì)胞的損傷、抑制作用。
 
細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3） 含量：>1x10^6 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
 

CHO-GS中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（谷氨酰胺系統(tǒng)）

運(yùn)輸和保存

（1）使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。

（2）收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至250px培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
 
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
                      

細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 貼壁生長(zhǎng)：準(zhǔn)備DMEM/F12培養(yǎng)基(推薦0005, 添加200nM L-Glutamine)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
懸浮生長(zhǎng)：使用專用懸浮生長(zhǎng)無(wú)血清培養(yǎng)基：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,貨號(hào)：24361C)
添加物：
L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,貨號(hào)：G8540-25G）
Anti-Clumping Agent(Gibco，貨號(hào)：01-0057AE)
備注：CD-CHO CHO Serum-free Medium請(qǐng)按照培養(yǎng)基配制說(shuō)明書配制，L-谷氨酰胺配制濃度為200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍，如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗結(jié)團(tuán)劑使用為1%，即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗結(jié)團(tuán)劑）
備注：加入谷氨酰胺合成酶的抑制物甲硫氨酸亞砜(methionine sulphoximine ,MSX) ,可使 GS基因及與之相連的目的基因一起擴(kuò)增,達(dá)到提高目的基因表達(dá)水平的目的
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。