詳細(xì)介紹
Origami(DE3)化轉(zhuǎn)表達(dá)感受態(tài)
產(chǎn)品簡介 JM109(DE3)菌株來源于 JM109,用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動子的表達(dá)載體(如 pET 系 列)的基因。λ 噬菌體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶,該區(qū)整合于 JM109 的染色體上,所以稱 為 JM109(DE3)。可同時表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶,用于 pET 系列,pGEX, pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測, JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。 存儲條件 -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 質(zhì)量控制 除 pRARE 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留; 化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min; 3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min; 4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min; 5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
Origami(DE3)化轉(zhuǎn)表達(dá)感受態(tài)
注意事項 1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用; 2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10; 3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可; 4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。產(chǎn)品簡介 JM109(DE3)菌株來源于 JM109,用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動子的表達(dá)載體(如 pET 系 列)的基因。λ 噬菌體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶,該區(qū)整合于 JM109 的染色體上,所以稱 為 JM109(DE3)。可同時表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶,用于 pET 系列,pGEX, pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測, JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。 存儲條件 -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 質(zhì)量控制 除 pRARE 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留; 化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min; 3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min; 4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min; 5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。 注意事項 1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用;
Origami(DE3)化轉(zhuǎn)表達(dá)感受態(tài)
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10; 3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可; 4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。產(chǎn)品簡介 JM109(DE3)菌株來源于 JM109,用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動子的表達(dá)載體(如 pET 系 列)的基因。λ 噬菌體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶,該區(qū)整合于 JM109 的染色體上,所以稱 為 JM109(DE3)。可同時表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶,用于 pET 系列,pGEX, pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測, JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。 存儲條件 -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 質(zhì)量控制 除 pRARE 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留; 化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min; 3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min; 4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min; 5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。 注意事項 1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用; 2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10; 3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可; 4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。