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PCR測定試劑盒

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  • 型號 50T
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  • 所在地 上海市

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更新時間:2024-09-11 16:48:17瀏覽次數(shù):1334

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產(chǎn)品簡介

CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 YS31646-R 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
PCR測定試劑盒引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
NA在體外大量擴增。

詳細介紹

實驗過程:
一、PCR測定試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。

原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

Lactate Dehydrogenase isozyme H4 antibody原裝、分裝組蛋白H3(116-136),N15-39

LOXL1 antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒1型及2型蛋白酶底物

LGALS3BP antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1膜蛋白gp41(1-23)酰胺(隔離種群BRU/JRCSF)

HADH antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1膜蛋白gp120(278-292)(BH10, BH8,HXB2, HXB3, PV22菌株)

Histone H1t antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1(137-154)

ICA69 antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1張口器蛋白p24(194-210)

TMEM184A antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1張口器蛋白p24(65-73)(種群MAL/U455)

Arg2 antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1反轉(zhuǎn)蛋白(34-50)

FAAH2 antibody原裝、分裝人體免疫缺陷病毒-1 tat蛋白(1-9)PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原裝、分裝gp100 (177-186)

PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原裝、分裝gp100 (178 - 187)

PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原裝、分裝gp100 (457 - 466)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原裝、分裝gp100 (476 - 485)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原裝、分裝gp100 (570-579)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原裝、分裝gp100 (614-622)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原裝、分裝gp100 (619-627)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原裝、分裝gp100 (639-647)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原裝、分裝gp120,人體免疫缺陷病毒
PCR測定試劑盒環(huán)加酶2檢測試盒20mg

環(huán)鳥苷檢測試盒20mg

環(huán)腺苷檢測試盒20mg

嘌呤化酶檢測試盒20mg

黃體生成素檢測試盒20mg

蛔蟲抗體檢測試盒20mg

混合淋巴細胞反應(yīng)封閉子檢測試盒20mg

混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域檢測試盒20mg

活化蛋白C檢測試盒20mg

 

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