一、導致高基線和變化基線的流動相雜質:
雜質在流動相中高度溶解的特定情況下,它們不會被色譜柱截留,并有助于在整個色譜圖中產生高于正常的檢測器信號。使用梯度洗脫時,如果雜質僅存在于梯度中使用的一種溶劑中,則檢測器信號可能會緩慢變化并且與在任何時間點對流動相有貢獻的溶劑比例有關。
流動相雜質不會表現為看起來像典型色譜峰的信號特征,因此它們不會直接與分析物峰本身發生沖突。但是如果雜質的物理化學性質與分離中的目標分析物相似,則雜質可以表現為基線中看起來像典型峰的特征。有時這些被稱為“鬼峰",因為即使沒有樣品注入,它們也會持續存在于基線中。
二、檢測器對主要流動相組分的響應:
有時候用于 LC 方法的溶劑制備中的微小變化會對基線的外觀產生巨大影響。這種效應的一個典型例子是從磷酸鹽緩沖流動相變為使用甲酸作為添加劑的流動相。盡管磷酸鹽物質對低至約 200 nm 的紫外光具有高度透明性,但羧酸鹽物質(如甲酸鹽、乙酸鹽)比約 230 nm 以下的磷酸鹽吸收更多。當使用梯度洗脫時,很容易觀察到這種差異,并且添加劑僅存在于流動相梯度中使用的一種溶劑中(例如,大部分水性溶劑)。
三、由于泵問題導致流動相組成不一致:
粘性止回閥和滯留氣泡是高壓泵頭流量不一致的常見原因,當二元泵系統中的兩個泵中的一個發生故障時,可能會導致通過 HPLC 色譜柱并最終到達檢測器的流動相成分發生變化。如果使用中的檢測器對這些成分變化很敏感,那么異常檢測器基線可能是真正由泵引起的問題的征兆。舉個例子, A 溶劑含有乙酸銨,B 溶劑是乙腈,并且在 210 nm 處使用 UV 檢測的情況。在這種情況下,A 溶劑比 B 溶劑吸收更多的光,但如果 A/B 混合物的成分隨時間保持一致,則將觀察到平滑、平坦的檢測器基線。但是,如果來自 A 通道的流量由于止回閥問題或氣泡而變得不一致,則 A/B 混合物的成分將不一致,從而導致基線中出現鋸齒狀圖案。
四、溫度影響:
不同的檢測器以不同的方式受到溫度變化的影響。折射率 (RI) 檢測的信號基線對溫度變化非常敏感。因此,穩定檢測器本身和實驗室環境的溫度將有助于最大限度地減少基線漂移。UV 吸光度檢測器也容易發生溫度變化,這會導致基線漂移,但與 RI 檢測器相比,變化程度較小。與過去的舊設計相比,現代紫外線檢測器設計對實驗室溫度變化的影響要小得多。
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