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怎樣在ELISA試劑盒檢測中得出結果
閱讀：318 發布時間：2016-9-23大鼠ELISA試劑盒檢測系統可謂是免疫學反應應用到科研中zui為靈敏的技術手段?？墒窃谛吕鲜植僮鬟^程中總是會出現或大或小的問題。本公司總結7步ELISA檢測實驗經驗，做好這7步您就能得出的實驗結果。
1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。
3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據試驗具體來實踐。
4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干擾物質，在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大(當然有條件的用洗板機除外)，洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統可是不小的影響。大鼠ELISA試劑盒
5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用PBS稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費，太低則著色淺。
6、顯色：顯色系統又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統。注意顯色系統酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉。
AGPHD1 氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體
ASGPR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5 A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L 小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體
ASTE1 ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B 磷酸化自噬相關蛋白4B抗體
AFAP 微絲相關蛋白1抗體
ADORA1 腺苷A1A受體抗體
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體
ABAT γ氨基丁酸轉氨酶抗體
A2BP1 共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體
ADAM17 腫瘤壞死因子α轉換酶
ARNT2 芳香烴受體核轉錄蛋白2抗體
ABH8 AlkB同源蛋白8抗體
大鼠ELISA試劑盒