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詳細介紹
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抗HaloTag®單克隆抗體 Anti-HaloTag® Monoclonal Antibody
G9211_Anti-HaloTag--單克隆抗體_3
針對HaloTag®蛋白的單克隆抗體
與其他非HaloTag®蛋白幾乎沒有交叉反應
可以通過Western blot檢測低0.5–1ng的HaloTag®融合蛋白
以1mg / ml的濃度提供
尺寸：200mg
Anti-HaloTag®單克隆抗體是針對HaloTag®蛋白的小鼠單克隆抗體，可用于通過Western blot檢測HaloTag®融合蛋白。 HaloTag®平臺滿足了細胞成像，蛋白質純化和蛋白質下拉應用中功能蛋白質分析的靈活性需求。了解有關HaloTag®技術的更多信息。
應用：完整的HaloTag®融合蛋白的免疫學檢測，專門用于蛋白質印跡。蛋白質印跡的建議工作稀釋度為PBS中的1：1,000。
通訊協定
完整協議
HaloTag®技術：專注于成像技術手冊
1.HaloTag®技術和細胞成像簡介了解蛋白質的功能作用以及它們如何在細胞內相互作用越來越重要。通常需要多次重組蛋白融合才能完成這項研究，由于在不同應用之間移動效率低下，有時可能很慢且麻煩。結果，需要提供在表達和定位，蛋白質純化，蛋白質相互作用發現，篩選和進一步的功能分析之間具有靈活性的重組蛋白質標簽。 HaloTag®平臺（a–g）滿足了功能蛋白分析靈活性的需求。這種模塊化技術基于融合標簽和合成配體之間共價鍵的形成，旨在全面表征細胞和生化環境中蛋白質的功能。有多種HaloTag®配體（a–g）和試劑盒可用于熒光細胞成像和蛋白質捕獲/純化，以及可定制的反應性配體構建基塊（a，e，f）。 HaloTag®報告基因蛋白是水解酶的一種工程化，無催化活性的衍生物，可與HaloTag®配體形成共價鍵（圖1）。在生理條件下，該共價鍵快速形成且高度特異性且基本上不可逆，從而形成即使在嚴格條件下也穩定的復合物（1-3）。 HaloTag®蛋白是33kDa的單體蛋白，不是哺乳動物，植物或大腸桿菌細胞內源的；因此，沒有非特異性活性水平，只有高標記特異性。該技術已成功用于許多系統，包括：哺乳動物細胞（4），細菌（5），酵母（6），植物（7）和動物模型（8）。
使用HaloTag®熒光配體進行細胞成像的優勢在于可以地進行標記的時空控制：HaloTag®技術的模塊化性質以及與配體的快速結合動力學，可以對蛋白質運輸和周轉進行直接成像。由于可用的配體既具有變化的熒光光譜，也具有細胞滲透和不滲透的特性，因此用戶可以對標記進行空間和時間控制。例如，研究人員只能用不滲透細胞的配體標記膜結合蛋白的表面池，并跟蹤其生物學，內在化或其他命運。或者可以先用一種“顏色”的配體標記蛋白質，然后在一段時間后再次用含有不同顏色的染料的配體標記蛋白質。這種脈沖追蹤標記允許直接觀察蛋白質隨時間的運輸和/或更新。
圖1.HaloTag®融合蛋白顯示了與TEV位點成比例的連接子以及與HaloTag®配體共價相互作用的結合袋。標記活細胞，然后對活細胞或固定細胞進行成像，和/或直接運行凝膠進行定量：所有HaloTag®熒光配體均允許對活細胞進行標記和成像。根據您的工作流程需要，可以通過一個清洗步驟（一個小時內）快速完成標簽，或者使用無洗程序進行一整夜的標簽。由于HaloTag®融合蛋白和配體之間共價鍵的穩定性以及染料本身的穩定性，也可以對通過標準免疫細胞化學方案操作的固定細胞進行成像。這種穩定性還允許使用熒光掃描儀通過SDS-PAGE直接分析標記的細胞。僅設計一個可用于多種應用程序的基因構建體：無需設計和克隆新的表達構建體即可獲得新功能。除細胞成像外，相同的融合蛋白還可以純化為單個純蛋白，或者與它的搭檔一起下拉以發現新的蛋白相互作用。使用HaloLink™樹脂從HaloTag®熒光配體轉換為HaloTag®純化和下拉系統，可有效捕獲和回收HaloTag®融合蛋白或復合物。
用戶要提供的材料（解決方案組合物請參見第9.B節。）•裝有表達HaloTag®融合蛋白的細胞的密閉玻璃蓋罩•37°C時適合細胞使用的完整培養基•培養基中缺少酚紅37°C（可選）•1X PBS（pH 7.5，可用于洗滌）•共聚焦顯微鏡或寬視野熒光顯微鏡，配有合適的濾光片組和/或激光器（請參見第9.A節和圖2）•37°C + CO2細胞培養培養箱1.在即將加入細胞之前，在溫暖的培養基中制備HaloTag®配體的1：200稀釋液。這是5倍的工作液解決方案。 2.用5XHaloTag®配體工作儲備溶液替換現有體積的五分之一，標記細胞，并輕輕混合。因此建議的終標記濃度建議為5µM TMR。 3.5µM AlexaFluor®660; 1µM diAcFAM，OregonGreen®或AlexaFluor®488；和10µM香豆素配體。 3.在37°C + CO2細胞培養箱中孵育15分鐘。 4.對于可透過細胞的配體，請用等體積（或更大體積）的溫暖新鮮培養基（或1X PBS [pH 7.5]）輕輕替換含配體的培養基。重復兩次，以溫暖的*培養基結束，共進行三遍*漂洗，然后繼續執行步驟5。對于細胞不滲透的配體（含AlexaFluor®的配體），請用相等（或更大）的濃度替換含配體的培養基體積的溫熱新鮮培養基兩次，然后進行步驟7。因為它們不滲透細胞，所以這些配體不需要洗去未結合的配體。 5.在細胞培養箱中于37°C + CO2的*培養基中培養細胞30分鐘，以洗滌未結合的配體。 6.用等體積的新鮮溫熱培養基替換培養基。使用缺少酚紅的培養基可以改善成像效果。 7.轉移顯微鏡，并捕獲圖像。
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