產(chǎn)品名稱
A498 人腎癌細(xì)胞(通過STR)
(Cat.No:XK-Y1034)
適用范圍
本產(chǎn)品*于科學(xué)研究,絕不可
作為人類或者動物疾病的治療產(chǎn)品使
用。
*培養(yǎng)基配置
MEM + 10% FBS + 1% P/S
細(xì)胞圖片
產(chǎn)品描述
種屬:
人源(Homo sapiens)
組織:
腎(Kidney)
疾?。?
癌(Carcinoma )
細(xì)胞形態(tài): 上皮細(xì)胞樣(Epithelial )
生長特性: 貼壁生長(Adherent)
培養(yǎng)環(huán)境:
37℃ , 5% CO2 ,95% AIR
拆包
1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液,如有,請拍照并及時與技
術(shù)聯(lián)系。
2.請立即將細(xì)胞從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進(jìn)行處理。
T25 培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞操作步驟
1. 75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40
×,100×,200×各一張)前三天照片為重要售后依據(jù),不提供或未
拍照默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3. 不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后
再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
4. 貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加
配制好的*培養(yǎng)基 5-6ml。放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度到
80%以上,進(jìn)行傳代。
懸浮細(xì)胞:將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基離心收集,重懸計數(shù)根據(jù)密度進(jìn)行
分瓶,密度在 3x10^5/ml 為宜。
注意:*次傳代比例建議 1:2,之后可根據(jù)細(xì)胞密度和增
殖情況適當(dāng)調(diào)整。
凍存管細(xì)胞的操作步驟
1. 收到細(xì)胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝
破損干冰已*揮發(fā)等問題,請即時聯(lián)系。
2. 將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至-80 度冰箱(不超過一周)或液氮保存,建議盡早
復(fù)蘇。
3. 復(fù)蘇*管后有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系,會有技術(shù)人員與
您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
注意:為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請立即解凍
復(fù)蘇細(xì)胞。
細(xì)胞傳代
1. 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)
液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀
察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml *培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打
細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心
5min;
3. 棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml *培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)
行分瓶傳代,最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞復(fù)蘇
1. 從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其
置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦
拭凍存管外壁;
2. 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml *培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,
1000rpm 離心 5min;
3. 棄上清,沉淀用 6ml *培養(yǎng)基重懸,接種 25cm2培養(yǎng)瓶,于 37℃,
5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1. 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)
液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀
察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使
之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
3. 用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍
存管中;
4. 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h
后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。