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高校實(shí)驗(yàn)室如何去觀察綠色熒光蛋白GFP？
閱讀：8047 發(fā)布時(shí)間：2021-1-5GFP是什么？GFP 綠熒光蛋白(Green Fluorescent Portein，GFP)
綠色熒光蛋白是一類存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動(dòng)物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白，當(dāng)受到紫外或藍(lán)光激發(fā)時(shí)，發(fā)射綠色熒光。其特點(diǎn)在于：它產(chǎn)生熒光無需底物或輔因子，發(fā)色團(tuán)是其蛋白質(zhì)一級序列固有的來源于水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩(wěn)定，無種屬限制，已在多種動(dòng)植物細(xì)胞中表達(dá)成功并產(chǎn)生熒光。GFP 的熒光受外界的影響較小，另外GFP 的檢測十分方便，而對細(xì)胞的傷害小。
綠色熒光蛋白GFP的發(fā)光特性：
GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外），并有一個(gè)峰值為470nm的副吸收峰（藍(lán)光）；發(fā)射光譜峰值為509nm（綠光），并帶有峰值為540nm的側(cè)峰（Shouder）。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發(fā)光對細(xì)胞的傷害小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強(qiáng)，特別是在450～490nm藍(lán)光波長下穩(wěn)定。類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高，抗光漂白能力強(qiáng)，因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報(bào)告蛋白，其作用是任何其它酶類報(bào)告蛋白*的。但因?yàn)镚FP不是酶，熒光信號沒有酶學(xué)放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報(bào)告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。
熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應(yīng)用：
檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）基因、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動(dòng)物：小鼠、兔子、猴子等；
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物：細(xì)菌、真菌、酵母等；
檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達(dá)；
綠色熒光蛋白GFP的常規(guī)觀察方法有三種：
1.熒光顯微鏡
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ： 熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實(shí)驗(yàn)室普及，但不足的是必須采集葉片或動(dòng)物切片進(jìn)行觀察，對培養(yǎng)的標(biāo)本進(jìn)行破壞，無法進(jìn)行活體觀察。
2.紫外光源
采用紫外光源（又叫紫外線燈、黑光燈）觀察也非常方便，但如果觀察植物，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會(huì)發(fā)出熒光，對gfp發(fā)出的熒光也會(huì)產(chǎn)生干擾，另外，標(biāo)本長時(shí)間在紫外光源照射下對GFP標(biāo)本組織也會(huì)造成破壞。
3.便攜式GFP激發(fā)光源
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡）是便捷、方便的觀察方法，因GFP在470nm有一個(gè)很高的吸收峰，采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光，在觀察gfp熒光時(shí)，因?yàn)榧ぐl(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線，佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國LUYOR-3260便攜式激發(fā)光源。因此，使用便攜式GFP激發(fā)光源為方便有效的觀察辦法。
下面為您推薦LUYOR-3415RG雙波長熒光蛋白激發(fā)光源
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢：
1.大功率輸出，無需暗室，也可輕松激發(fā)熒光。
2.檢測效率高，黑暗中檢測一目了然
3.LED壽命50000h，且系統(tǒng)穩(wěn)定，可長時(shí)間使用
4.直接檢測，而無需用底物顯色，所以安全，對被檢測對象無傷害
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術(shù)參數(shù)：
波長：可任意選擇2種波長：365nm，400nm， 450nm， 485nm，520nm
質(zhì)量：凈重0.9kg，毛重：4kg，尺寸：180x200mm（長x高），頭部直徑120mm。
功率：單波長15w，總功率27w。
輸入電壓：交流100-260v，頻率50/60Hz。
包裝箱尺寸：400x300x150mm（長x寬x高）
距燈150mm處照射直徑為180mm
