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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 細菌外膜蛋白提取試劑盒

細菌外膜蛋白提取試劑盒
  • 細菌外膜蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2024-11-24 16:43:49瀏覽次數：63評價

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產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細菌外膜蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陰性菌菌體中提取外膜蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細菌外膜組份。提取過程簡單方便。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
細菌
產品特點
1.使用方便。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
5.本品不含EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應用。
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
使用方法
1. 提取液準備：
每500 μl提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 收集待提取菌體，用PBS洗菌體2次。
3. 按每50-150 mg濕重菌體樣本加入500 μl提取液A（大約菌體和提取液體積比1:2-1:5，淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩30分鐘-1小時。
4. 將提取液在2-8℃下，12000×g力離心5分鐘，取上清。
5. 將上清液在37℃水浴10分鐘。
6. 在37℃ 500-1000×g力離心3分鐘。
7. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層大約30-50μl液體。
8. 用50-150μl冷的膜蛋白溶解液溶解該溶液，即得細菌外膜蛋白樣品。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細胞上樣量。處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
參考文獻
1.Yanshan Gong, et al.
Characterization of the hemolytic activity of Riemerella anatipestifer
Microbiology-SGM 2020

2.Lili Chen, et al.
Ultrasensitive detection of H. pylori in human beings feces based on Immunomagnetic Beads capture and fluorescent quantum dots
Analyst 2019

3.Tongxiang Song, et al.
Characteristics of the iron uptake-related process of a pathogenic Vibrio splendidus strain associated with massive mortalities of the sea cucumber Apostichopus japonicus
Journal of Invertebrate Pathology 2018

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