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支原體膜蛋白提取試劑盒

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品牌 貝博生物
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更新時間：2024-11-24 16:40:26瀏覽次數：67評價

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產品分類品牌分類

蛋白質生物學

蛋白提取和裂解

細胞器分離

蛋白純化

蛋白質濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學

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貝博生物

產品簡介

產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 支原體膜蛋白提取試劑盒是一種方便高效的高產膜蛋白提取試劑盒。支原體膜蛋白提取試劑盒可以從各種支原體中提取總膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。該試劑盒提取的蛋白具有天然活性，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀、質譜等各種下游蛋白研究。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

支原體

產品特點

1.使用方便，將蛋白提取的時間縮短至1小時。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
5.本品不含EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應用。

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液準備：
每500ul提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 收集好的支原體樣本用PBS洗滌后，加入300-500ul冷的提取液A，充分混勻。
3. 置2-8℃條件下振蕩30分鐘-2小時。至支原體裂解，沉淀體積明顯減少。
4. 將提取液在2-8℃低溫下12000×g離心5分鐘，取上清。
5. 在上清中加入3-5ul提取液B，充分混勻。
6. 在37℃水浴10分鐘。
7. 在37℃， 1000×g離心3分鐘。
8. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層大約30-50ul液體。
9. 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該溶液，即得支原體膜蛋白樣品。
10. 該樣品可以用BCA方法進行定量，調整相應的濃度用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大樣本的上樣量以提高膜蛋白濃度。
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。