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參考價	面議

蛋白質生物學

蛋白提取和裂解

細胞器分離

蛋白純化

蛋白質濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學

貝博生物

產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 甲醛固定組織蛋白提取試劑盒適用于從各種經甲醛固定的組織樣本中提取總蛋白，提取過程簡單方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用貝博其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品BB-38113）。貝博® BBproExtra® 可以提供各種蛋白質提取、裂解、酶活測定、細胞器分離、免疫組織化學、蛋白表達、蛋白標記等蛋白質相關試劑盒產品。

詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物組織

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 注意低豐度蛋白的檢測方法。
? 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM，r/min）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉速為3000 rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

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使用方法

1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 將組織樣品用刀剪碎，每100 mg樣本中加入500 μl蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心15分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
固定組織的蛋白質回收率在30%左右。
需要加大組織上樣量，調整提取液用量來調整蛋白濃度。

2.WB實驗無條帶？
固定組織的蛋白質回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質末端基團與甲醛之間形成交聯鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環等都會參與甲醛固定蛋白質的基團反應，在這個過程中，絕大部分常規的暴露抗原決定基團遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質做WB成功的概率較低，選用抗體說明書上同時可以做WB和IHC的抗體。

參考文獻

1.Wei Liu et al.
TRIP6 regulates the proliferation, migration, invasion and apoptosis of osteosarcoma cells by activating the NF?κB signaling pathway
Experimental and Therapeutic Medicine 2020

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