詳細介紹
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
產品名稱 | 肥胖帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Taenia saginata |
編號 | BJP2949 |
通用原則:
1,胖帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的能在100-150bp內,擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發卡結構的形成。
b),探針設計指導
1,在設計引物之前設計探針
2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,提供待檢基因相關信息;
2.簽訂技術服務合同,支付預付款(30-50%);
3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄;
5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結果和數據分析,形成報告。
以下是公司*產品:
對香豆酸人金屬肽酶含血小板反應蛋白7(ADAMTS7)CLIA試劑盒
對香豆酸人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)CLIA試劑盒
對香豆酸人載脂蛋白A4(apo-A4)CLIA試劑盒
4-基-2-氧基苯酚人金屬肽酶含血小板反應蛋白1(ADAMTS1) CLIA試劑盒
4-基-2-氧基苯酚人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)CLIA試劑盒
4-基-2-氧基苯酚人5-羥色胺-N-?;D移酶(AA-NAT)CLIA試劑盒
5-羥色胺鹽酸鹽人DNA(無嘌呤/無嘧啶堿基位點)裂解酶(APEX1)CLIA試劑盒
5-羥色胺鹽酸鹽人膜聯蛋白-A2(Anxa2)CLIA試劑盒
2,4-二基吡咯人抗頂體蛋白抗體(ACR)CLIA試劑盒
2,4-二基吡咯人血管生成素樣蛋白2(ANGPTL2)CLIA試劑盒試管架PhosphoWorks™ phosphatidylserine reagent *Red fluorescence*
試管架Calcein
立柱試管架Calcein, AM
試管架Calcein blue
四用試管架Calcein blue, AM
兩用試管架DiA [4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide]
巴氏吸管DiD perchlorate *Oil* [1,1’-Dioctadecyl-3,3,3‘,3’-tetramethylindodicarbocyanine perchlorate]
巴氏吸管DiD triflate [1,1‘-Dioctadecyl-3,3,3’,3‘-tetramethylindodicarbocyanine, triflate]
巴氏吸管DiD labeling solution [1,1’-Dioctadecyl-3,3,3‘,3’-tetramethylindodicarbocyanine, triflate] *5 mM DMSO solution*
巴氏吸管DiIC12(3) perchlorate [1,1‘-Didodecyl-3,3,3’,3‘-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]
產品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生,提高熒光定量PCR反應的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統熒光染料相比,對PCR反應抑制更小,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系,進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,方便用戶使用;
試劑盒的通用性強,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。