基本信息：

產品名稱：淀粉磷酸化酶（SP)紫外分光光度法

測試方法:紫外分光光度法

規格 : 50管/48樣

貨號：YS-01S6754

測定意義

淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過程一的可逆反應酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。

在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質體中，負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細胞質基質中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產生葡萄糖-1-磷酸，負責葡萄糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過程中的關鍵酶。

在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數量級，一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理：

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產生葡萄糖-6-磷酸，并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產生NADPH，使340nm下吸光值增加。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
用途范圍：僅供科研研究實驗

需自配儀器：

1、酶標儀（比色測定波長為450nm）

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3、微量移液器

實驗方法學：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉動，每隔5～10分鐘轉動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

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