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谷胱甘肽S轉移酶(GST)微量法

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更新時間:2022-03-08 14:38:17瀏覽次數:265

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 100管/96樣
貨號 YS-01S6390 應用領域 化工
主要用途 公司產品僅供于科研使用    
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詳細介紹

需自配儀器:

1、酶標儀(比色測定波長為450nm)

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)

3、微量移液器

基本信息:

產品名稱:谷胱甘肽S轉移酶(GST)微量法

測試方法:微量法

規格 : 100管/96樣

貨號:YS-01S6390

測定意義

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族,主要存在于細胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分,主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合,使親電化合物變為親水物質,易于從膽汁或尿液中排泄,達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此,GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外,因為GST具有GSH-Px活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意,GST催化的反應減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

測定原理:

GST催化GSH與CDNB結合,其結合產物的光吸收峰波長為340nm;通過測定340nm波長處吸光度上升速率,即可計算出GST活性。

需自備的儀器和用品:

紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1ml石英比色皿、雙蒸水。
用途范圍:僅供科研研究實驗

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。

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選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

 


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