細胞名稱  蘭州黑白花奶牛舌尖細胞；NHBT培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣

品牌 貼壁生長

特征特性

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法

傳代情況

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

蘭州黑白花奶牛舌尖細胞；NHBT培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-PLC beta 3/Phospholipase C beta 3/FITC 熒光素標(biāo)記磷酯酶Cβ3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-NFBD1/MDC1/FITC 熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C10orf63/Enkurin 10號染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格 0.2ml

Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗原 0.5mg

HCG Beta(4H7) 英文名稱： 人絨毛膜促性腺激素β亞基單抗 0.1ml

Rhesus antibody Rh RNF150 環(huán)指蛋白150抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-NFBD1/MDC1/FITC 熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Jo1/HRS(Human Jo-1 Antibody) ELISA Kit 人Jo1抗體/抗組氨酰tRNA合成酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-IL-32/NK4 白介素32抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRPAP1/MRAP 脂蛋白受體相關(guān)蛋白抗體(低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1) 規(guī)格 0.1ml

BMPs(Human bone morphogenetic proteins) ELISA Kit 人骨形成蛋白 96T

Phospho-Rb (Ser612) 英文名稱： 磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml

CHAC2 英文名稱： 陽離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體 0.1ml

Anti-IL-32/NK4 白介素32抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml

GFPT2 英文名稱： D-果糖6磷酸轉(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-IL-1 Beta/FITC 熒光素標(biāo)記白介素1β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-Polycystin 2/FITC 熒光素標(biāo)記多囊腎蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
sCKR(Human soluble cytokine receptor) ELISA Kit 人可溶性細胞因子受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Galectin 3 半乳糖凝集素3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.1ml

EAR1(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 1) ELISA KIT 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1 96T

phospho-RelB(Ser551) 英文名稱： 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子RelB蛋白抗體 0.1ml

CCDC139 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白139抗體 0.2ml

Anti-Galectin 3 半乳糖凝集素3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。